Precisión del ratón de 96 Wells alta y equipo sensible de Resistin ELISA
Cat.No E0263Mo
Gama estándar de la curva: 0.3ng/ml - 90ng/ml
Sensibilidad: 0.13ng/ml
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta del ratón Nesfatin1 (también conocido como Retn) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo de Retn del ratón. Retn presenta en la muestra se añade y ata a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated de Retn del ratón se añade y ata a Retn en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated Retn. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de ratón Retn. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Reactivo proporcionado
| Componentes |
Cantidad |
| Solución estándar (96ng/ml) |
0.5ml x1 |
| Placa cubierta primero de ELISA |
12 * 8 tiras bien x1 |
| Diluyente estándar |
3ml x1 |
| Streptavidin-HRP |
6ml x1 |
| Pare la solución |
6ml x1 |
| Solución A del substrato |
6ml x1 |
| Solución B del substrato |
6ml x1 |
| Concentrado del almacenador intermediario del lavado (30x) |
20ml x1 |
| Anticuerpo de Retn del ratón de Biotinylated |
1ml x1 |
| Instrucción del usuario |
1 |
| Sellador de la placa |
2 imágenes |
| Bolso de la cremallera |
1 imagen |
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
el *Sample no se puede diluir con este equipo. Debido el material utilizamos para preparar el equipo, la interferencia de matriz de la muestra puede presionar falso la especificidad y la exactitud del análisis.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo anti-Retn 10μl a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.
Cálculo del resultado
Construya una curva estándar trazando el OD medio para cada uno estándar en (y) el eje vertical contra la concentración en (x) el eje horizontal y dibuje una curva del mejor ajuste a través de los puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con software computarizado de la curva-colocación y la línea del mejor ajuste se puede determinar por análisis de regresión.
