Alta sensibilidad y especificidad GGT1 Kit de ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas ovinas 96 pocillos * Este producto es solo para investigación, no para uso en procedimientos de diagnóstico. Se recomienda leer estas instrucciones por completo antes de usar.
Cat. No E 0203Sh
Rango de curva estándar : 0.3ng / ml - 90ng / ml
Sensibilidad : 0.17ng / ml
Tamaño : 96 pozos
Un principio de ensayo
Este kit de ensayo elisa es un ensayo de inmunosorbente ligado a enzimas (ELISA). La placa ha sido recubierta previamente con el anticuerpo Sheep GGT1. Se agrega GGT1 presente en la muestra y se une a los anticuerpos recubiertos en los pocillos. Y luego se agrega el anticuerpo biotinilado de oveja GGT1 y se une a GGT1 en la muestra. Luego se agrega estreptavidina-HRP y se une al anticuerpo biotinilado GGT1. Después de la incubación, la estreptavidina-HRP no unida se lava durante una etapa de lavado. Luego se agrega la solución de sustrato y se desarrolla color en proporción a la cantidad de ovejas GGT1. La reacción se termina mediante la adición de solución de parada ácida y la absorbancia se mide a 450 nm.
Te pretendí
Este kit tipo sándwich es para la detección cuantitativa precisa de ovejas Gamma-glutamiltranspeptidasa 1 (también conocida como GGT1) en suero, plasma, sobrenadantes de cultivos celulares, lisados celulares, homogeneizados de tejidos.
Recisión P
Precisión intraensayo (precisión dentro de un ensayo) Se analizaron tres muestras de concentración conocida en una placa para evaluar la precisión intraensayo.
Precisión entre ensayos (precisión entre ensayos) Se analizaron tres muestras de concentración conocida en ensayos separados para evaluar la precisión entre ensayos.
CV (%) = DE / media x 100
Intra-ensayo: CV <8%
Inter-ensayo: CV <10%
Reparación de reactivo P
Todos los reactivos deben llevarse a temperatura ambiente antes de su uso.
Estándar Reconstituya los 120 μl del estándar (96 ng / ml) con 120 μl de diluyente estándar para generar una solución madre estándar de 48 ng / ml. Permita que el estándar repose durante 15 minutos con agitación suave antes de hacer diluciones. Prepare puntos estándar duplicados diluyendo en serie la solución madre estándar (48ng / ml) 1: 2 con diluyente estándar para producir soluciones de 24ng / ml, 12ng / ml, 6ng / ml y 3ng / ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng / ml). Cualquier solución restante debe congelarse a -20 ° C y usarse dentro de un mes. La dilución de las soluciones estándar sugeridas es la siguiente:
| 48ng / ml | Norma No.5 | 120 μl original estándar + 120 μl estándar diluyente |
| 24ng / ml | Norma No.4 | 120 μl estándar No.5 + 120 μl estándar diluyente |
| 12ng / ml | Norma No.3 | 120 μl estándar n. ° 4 + 120 μl estándar diluyente |
| 6ng / ml | Norma No.2 | 120 μl estándar No.3 + 120 μl estándar diluyente |
| 3ng / ml | Norma No.1 | 120 μl estándar No.2 + 120 μl estándar diluyente |
| Concentración estándar | Norma No.5 | Norma No.4 | Norma No.3 | Norma No.2 | Norma No.1 |
| 96ng / ml | 48ng / ml | 24ng / ml | 12ng / ml | 6ng / ml | 3ng / ml |
Tampón de lavado Diluya 20 ml de Concentrado de tampón de lavado 25x en agua desionizada o destilada para obtener 500 ml de 1x tampón de lavado. Si se han formado cristales en el concentrado, mezcle suavemente hasta que los cristales se hayan disuelto completamente.
Un ensayo P rocedure
1. Prepare todos los reactivos, soluciones estándar y muestras según las instrucciones. Mantener los reactivos a temperatura ambiente antes de su uso. El ensayo se realiza a temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el ensayo. Inserte las tiras en los marcos para su uso. Las tiras no utilizadas deben almacenarse a 2-8 ° C.
3. Agregue 50 μl estándar al pozo estándar. Nota : No agregue anticuerpos al estándar porque la solución estándar contiene anticuerpos biotinilados.
4. Agregue 40 μl de muestra a los pocillos de muestra y luego agregue 10 μl de anticuerpo anti-GGT1 a los pocillos de muestra, luego agregue 50 μl de estreptavidina-HRP a los pocillos de muestra y los pocillos estándar (no en el pozo de control en blanco). Mezclar bien. Cubra el plato con un sellador. Incubar 60 minutos a 37 ° C.
5. Retire el sellador y lave la placa 5 veces con tampón de lavado. Remoje los pocillos con al menos 0,35 ml de tampón de lavado durante 30 segundos a 1 minuto para cada lavado. Para el lavado automático, aspire todos los pocillos y lave 5 veces con tampón de lavado, llenando los pocillos en exceso con tampón de lavado. Seque la placa sobre toallas de papel u otro material absorbente.
6. Agregue 50 μl de solución de sustrato A a cada pocillo y luego agregue 50 μl de solución de sustrato B a cada pocillo. Incubar la placa cubierta con un sellador nuevo durante 10 minutos a 37 ° C en la oscuridad.
7. Agregue 50 μl de solución de parada a cada pocillo, el color azul cambiará a amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor OD) de cada pocillo inmediatamente usando un lector de microplacas ajustado a 450 nm dentro de 10 minutos después de agregar la solución de parada.
Cálculo del resultado
Construya una curva estándar trazando el OD promedio para cada estándar en el eje vertical (Y) contra la concentración en el eje horizontal (X) y dibuje una curva de mejor ajuste a través de los puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con un software de ajuste de curvas basado en computadora y la mejor línea de ajuste se puede determinar mediante análisis de regresión.
