Equipo humano del análisis de la investigación CYP1A2 ELISA del laboratorio para la placa cuantitativa exacta del pozo de la detección 96
Cat.No E2281Hu
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (2400ng/L) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 1200ng/L. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo la solución común estándar (1200ng/L) 1:2 con el diluyente estándar para producir las soluciones 600ng/L, 300ng/L, 150ng/L y 75ng/L. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng/L). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 1200ng/L |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 600ng/L |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 300ng/L |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 150ng/L |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 75ng/L |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 2400ng/L |
1200ng/L |
600ng/L |
300ng/L |
150ng/L |
75ng/L |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 25x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Tamaño: 96 pozos
Almacenamiento: Almacene los reactivo en 2-8°C. para el almacenamiento de seis meses excesivo refieren a la fecha de caducidad lo guardan en los ciclos repetidos Avoid del deshielo de -20°C. Si se abren los reactivo individuales se recomienda que el equipo esté utilizado en el plazo de 1 mes.
el producto de los *This está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Precisión
La precisión del Intra-análisis (precisión dentro de un análisis) tres muestras de concentración sabida fue probada en una placa para evaluar la precisión del intra-análisis.
La precisión del Inter-análisis (precisión entre los análisis) tres muestras de concentración sabida fue probada en análisis separados para evaluar la precisión del inter-análisis.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-análisis: CV<8>
Inter-análisis: CV<10>
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta del citocromo humano P450 1A2 (también conocido como CYP1A2) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Principio del análisis
Este equipo del elisa del bocadillo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo humano CYP1A2. CYP1A2 presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo humano entonces biotinylated CYP1A2 se añade y ata a CYP1A2 en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated CYP1A2. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de CYP1A2 humano. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Precauciones
- Antes de uso, el equipo y la muestra del elisa del bocadillo se deben calentar naturalmente a la temperatura ambiente 30 minutos.
- Esta instrucción se debe seguir estrictamente en el experimento.
- Una vez que el número deseado de tiras se ha quitado, reselle inmediatamente el bolso para proteger el permanecer contra el deterioro. Cubra todos los reactivo cuando es parado.
- Make sure que mide con una pipeta orden y el índice de adición de bien-a-bien al medir con una pipeta los reactivo.
- La pipeta inclina y el sellador de la placa a disposición debe estar limpio y disponible evitar la contaminación cruzada.
- Evite usar los reactivo de diversos lotes juntos.
- La solución B del substrato es sensible a la luz, no expone la solución B del substrato para encenderse durante mucho tiempo.
- Pare la solución contiene el ácido. Lleve por favor la protección del ojo, de la mano y de piel al usar este material. Evite el contacto de la piel o de las membranas mucosas con el reactivo del equipo.
- El equipo del elisa del bocadillo no se debe utilizar más allá de la fecha de caducidad.
Resumen
1. Prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
2. Añada la muestra y el reactivo de ELISA en cada uno bien. Incube para 1 hora en 37°C.
3. Lave la placa 5 veces.
4. Añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos en 37°C.
5. Añada paran la solución y el color se convierte.
6. Lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
Cálculo del resultado
Construya una curva estándar trazando el OD medio para cada uno estándar en (y) el eje vertical contra la concentración en (x) el eje horizontal y dibuje una curva del mejor ajuste a través de los puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con software computarizado de la curva-colocación y la línea del mejor ajuste se puede determinar por análisis de regresión.
