Equipo sensible canino de la prueba de immunoensayo del Interleukin 10 de la investigación del laboratorio alto 2 horas de longitud del análisis
Cat.No E0006Ca
Principio del análisis
Este equipo de la prueba del elisa es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo canino IL-10. IL-10 presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo canino entonces biotinylated IL-10 se añade y ata a IL-10 en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated IL-10. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de IL-10 canino. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Uso previsto
Este equipo de la prueba del elisa está para la detección cuantitativa exacta del Interleukin canino 10 (también conocido como IL-10) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
el producto de los *This está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Reactivo proporcionado
| Componentes |
Cantidad |
| Solución estándar (800pg/ml) |
0.5ml x1 |
| Placa cubierta primero de ELISA |
12 * 8 tiras bien x1 |
| Diluyente estándar |
3ml x1 |
| Streptavidin-HRP |
6ml x1 |
| Pare la solución |
6ml x1 |
| Solución A del substrato |
6ml x1 |
| Solución B del substrato |
6ml x1 |
| Concentrado del almacenador intermediario del lavado (30x) |
20ml x1 |
| Anticuerpo canino IL-10 de Biotinylated |
1ml x1 |
| Instrucción del usuario |
1 |
| Sellador de la placa |
2 imágenes |
| Bolso de la cremallera |
1 imagen |
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
El tejido otros fluídos corporales aclara tejidos en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y para pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
el *Sample no se puede diluir con este equipo. Debido el material utilizamos para preparar el equipo, la interferencia de matriz de la muestra puede presionar falso la especificidad y la exactitud del análisis.
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (800pg/ml) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 400pg/ml. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (400pg/ml) con diluyente estándar para producir las soluciones 200pg/ml, 100pg/ml, 50pg/ml y 25pg/ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 pg/ml). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 400pg/ml |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 200pg/ml |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 100pg/ml |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 50pg/ml |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 25pg/ml |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 800pg/ml |
400pg/ml |
200pg/ml |
100pg/ml |
50pg/ml |
25pg/ml |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 600 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Resumen
1. Prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
2. Añada la muestra y el reactivo de ELISA en cada uno bien. Incube para 1 hora en 37°C.
3. Lave la placa 5 veces.
4. Añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos en 37°C.
5. Añada paran la solución y el color se convierte.
6. Lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
