96 equipo bien del bocadillo ELISA de Resistin del ratón del equipo de Retn ELISA del ratón de la placa modificado para requisitos particulares
Cat.No E0263Mo
Gama estándar de la curva: 0.3ng/ml - 90ng/ml
Sensibilidad: 0.13ng/ml
Tamaño: 96 pozos
el producto de los *This está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta del ratón Nesfatin1 (también conocido como Retn) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo de Retn del ratón. Retn presenta en la muestra se añade y ata a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated de Retn del ratón se añade y ata a Retn en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated Retn. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de ratón Retn. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Precauciones
- Antes de uso, el equipo y la muestra se deben calentar naturalmente a la temperatura ambiente 30 minutos.
- Esta instrucción se debe seguir estrictamente en el experimento.
- Una vez que el número deseado de tiras se ha quitado, reselle inmediatamente el bolso para proteger el permanecer contra el deterioro. Cubra todos los reactivo cuando es parado.
- Make sure que mide con una pipeta orden y el índice de adición de bien-a-bien al medir con una pipeta los reactivo.
- La pipeta inclina y el sellador de la placa a disposición debe estar limpio y disponible evitar la contaminación cruzada.
- Evite usar los reactivo de diversos lotes juntos.
- La solución B del substrato es sensible a la luz, no expone la solución B del substrato para encenderse durante mucho tiempo.
- Pare la solución contiene el ácido. Lleve por favor la protección del ojo, de la mano y de piel al usar este material. Evite el contacto de la piel o de las membranas mucosas con el reactivo del equipo.
- El equipo no se debe utilizar más allá de la fecha de caducidad.
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
El tejido otros fluídos corporales aclara tejidos en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y para pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (96ng/ml) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 48ng/ml. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (48ng/ml) con diluyente estándar para producir las soluciones 24ng/ml, 12ng/ml, 6ng/ml y 3ng/ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng/ml). Cualquier solución restante se debe congelar en -20℃ y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 48ng/ml |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 24ng/ml |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 12ng/ml |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 6ng/ml |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 3ng/ml |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 96ng/ml |
48ng/ml |
24ng/ml |
12ng/ml |
6ng/ml |
3ng/ml |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo anti-Retn 10μl a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.
Referances
“Resistin y expresión génica de la RELM-alfa en el tejido adiposo blanco de los ratones de la lactancia.”
Bing C., Gómez-Ambrosi J., Zabalegui N., Williams G., Trayhurn P.
Bioquímica. Biophys. Res. Commun. 296:458- 462(2002)
