Equipo obligatorio del Lectin ELISA de CustomizedMannan de la alta de la especificidad de la rata proteína obligatoria de Mannma
Ra de Cat.No E0629
Gama estándar de la curva: 0.5ng/ml - 100ng/ml
Sensibilidad: 0.25ng/ml
Almacenamiento: Almacene los reactivo en 2-8°C. para el almacenamiento de seis meses excesivo refieren a la fecha de caducidad lo guardan en los ciclos repetidos Avoid del deshielo de -20°C. Si se abren los reactivo individuales se recomienda que el equipo esté utilizado en el plazo de 1 mes.
Precisión
La precisión del Intra-análisis (precisión dentro de un análisis) tres muestras de concentración sabida fue probada en una placa para evaluar la precisión del intra-análisis.
La precisión del Inter-análisis (precisión entre los análisis) tres muestras de concentración sabida fue probada en análisis separados para evaluar la precisión del inter-análisis.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-análisis: CV<8>
Inter-análisis: CV<10>
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta de la proteína obligatoria de Mannma de la rata, Lectin obligatorio del manano (también conocido como MBP/MBL) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo de la rata MBP/MBL. MBP/MBL presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated de la rata MBP/MBL se añade y ata a MBP/MBL en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated MBP/MBL. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de la rata MBP/MBL. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Precauciones
- Antes de uso, el equipo y la muestra se deben calentar naturalmente a la temperatura ambiente 30 minutos.
- Esta instrucción se debe seguir estrictamente en el experimento.
- Una vez que el número deseado de tiras se ha quitado, reselle inmediatamente el bolso para proteger el permanecer contra el deterioro. Cubra todos los reactivo cuando es parado.
- Make sure que mide con una pipeta orden y el índice de adición de bien-a-bien al medir con una pipeta los reactivo.
- La pipeta inclina y el sellador de la placa a disposición debe estar limpio y disponible evitar la contaminación cruzada.
- Evite usar los reactivo de diversos lotes juntos.
- La solución B del substrato es sensible a la luz, no expone la solución B del substrato para encenderse durante mucho tiempo.
- Pare la solución contiene el ácido. Lleve por favor la protección del ojo, de la mano y de piel al usar este material. Evite el contacto de la piel o de las membranas mucosas con el reactivo del equipo.
- El equipo no se debe utilizar más allá de la fecha de caducidad.
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Observe
- Las concentraciones de la muestra deben ser predichas antes de ser utilizado en el análisis. Si la concentración de la muestra no está dentro de la gama de la curva estándar, los usuarios deben entrarnos en contacto con para determinar la muestra óptima para sus experimentos particulares.
- Las muestras que se utilizarán en el plazo de 5 días se deben almacenar en las muestras 2-8°C. se deben aliquoted o se deben almacenar en -20°C en el plazo de 1 mes o -80°C en el plazo de 6 meses. Avoid repitió ciclos hielo-deshielo.
- Las muestras se deben traer a la temperatura ambiente antes de comenzar el análisis.
- Centrifugadora para recoger la muestra antes de usar.
- Las muestras que contienen NaN3 no pueden ser probadas mientras que inhibe la actividad de la peroxidasa (HRP) del rábano picante.
- Recoja los supernatants cuidadosamente. Cuando los sedimentos ocurrieron durante almacenamiento, la centrifugación se debe realizar otra vez.
- La hemólisis puede afectar grandemente la validez de los resultados de la prueba. Tome el cuidado para minimizar la hemólisis.
el *Sample no se puede diluir con este equipo. Debido el material utilizamos para preparar el equipo, la interferencia de matriz de la muestra puede presionar falso la especificidad y la exactitud del análisis.
Resumen
1. Prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
2. Añada la muestra y el reactivo de ELISA en cada uno bien. Incube para 1 hora en 37°C.
3. Lave la placa 5 veces.
4. Añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos en 37°C.
5. Añada paran la solución y el color se convierte.
6. Lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
Cálculo del resultado
Construya una curva estándar trazando el OD medio para cada uno estándar en (y) el eje vertical contra la concentración en (x) el eje horizontal y dibuje una curva del mejor ajuste a través de los puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con software computarizado de la curva-colocación y la línea del mejor ajuste se puede determinar por análisis de regresión.
Referances
La “isquemia cerebral focal induce la proteína básica creciente del myelin y la transcripción crecimiento-asociada del gen protein-43 en áreas del peri-infarto en el cerebro de la rata.”
Gregersen R., Christensen T., Lehrmann E., Diemer N.H., Finsen B.
Cerebro Res 138:384- del Exp 392(2001)
