Equipo obligatorio modificado para requisitos particulares del Lectin MBP MBL ELISA del manano obligatorio de la proteína de Mannma de la rata
Ra de Cat.No E0629
Gama estándar de la curva: 0.5ng/ml - 100ng/ml
Sensibilidad: 0.25ng/ml
Tamaño: 96 pozos
Almacenamiento: Almacene los reactivo en 2-8°C. para el almacenamiento de seis meses excesivo refieren a la fecha de caducidad lo guardan en los ciclos repetidos Avoid del deshielo de -20°C. Si se abren los reactivo individuales se recomienda que el equipo esté utilizado en el plazo de 1 mes.
el producto de los *This está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo de la rata MBP/MBL. MBP/MBL presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated de la rata MBP/MBL se añade y ata a MBP/MBL en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated MBP/MBL. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de la rata MBP/MBL. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta de la proteína obligatoria de Mannma de la rata, Lectin obligatorio del manano (también conocido como MBP/MBL) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Precauciones
- Antes de uso, el equipo y la muestra se deben calentar naturalmente a la temperatura ambiente 30 minutos.
- Esta instrucción se debe seguir estrictamente en el experimento.
- Una vez que el número deseado de tiras se ha quitado, reselle inmediatamente el bolso para proteger el permanecer contra el deterioro. Cubra todos los reactivo cuando es parado.
- Make sure que mide con una pipeta orden y el índice de adición de bien-a-bien al medir con una pipeta los reactivo.
- La pipeta inclina y el sellador de la placa a disposición debe estar limpio y disponible evitar la contaminación cruzada.
- Evite usar los reactivo de diversos lotes juntos.
- La solución B del substrato es sensible a la luz, no expone la solución B del substrato para encenderse durante mucho tiempo.
- Pare la solución contiene el ácido. Lleve por favor la protección del ojo, de la mano y de piel al usar este material. Evite el contacto de la piel o de las membranas mucosas con el reactivo del equipo.
- El equipo no se debe utilizar más allá de la fecha de caducidad.
Reactivo proporcionado
| Componentes |
Cantidad |
| Solución estándar (128ng/ml) |
0.5ml x1 |
| Placa cubierta primero de ELISA |
12 * 8 tiras bien x1 |
| Diluyente estándar |
3ml x1 |
| Streptavidin-HRP |
6ml x1 |
| Pare la solución |
6ml x1 |
| Solución A del substrato |
6ml x1 |
| Solución B del substrato |
6ml x1 |
| Concentrado del almacenador intermediario del lavado (30x) |
20ml x1 |
| Anticuerpo de la rata MBP/MBL de Biotinylated |
1ml x1 |
| Instrucción del usuario |
1 |
| Sellador de la placa |
2 imágenes |
| Bolso de la cremallera |
1 imagen |
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (128ng/ml) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 64ng/ml. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (64ng/ml) con diluyente estándar para producir las soluciones 32ng/ml, 16ng/ml, 8ng/ml y 4ng/ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng/ml). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 64ng/ml |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 32ng/ml |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 16ng/ml |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 8ng/ml |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 4ng/ml |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 128ng/ml |
64ng/ml |
32ng/ml |
16ng/ml |
8ng/ml |
4ng/ml |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo de 10μl anti-MBP/MBL a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.
Resumen
1. Prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
2. Añada la muestra y el reactivo de ELISA en cada uno bien. Incube para 1 hora en 37°C.
3. Lave la placa 5 veces.
4. Añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos en 37°C.
5. Añada paran la solución y el color se convierte.
6. Lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
Referances
la “expresión Etapa-específica de la proteína básica del myelin en oligodendrocytes implica la represión de Nkx2.2-mediated que es aliviada por el factor de la transcripción Sp1.”
Wei Q., Miskimins W.K., Miskimins R.
J. Biol. Quím. 280:16284- 16294(2005)
