Especificidad del equipo de Elisa del ratón del bocadillo alta para la inmunoglobulina secretor A

Alta inmunoglobulina secretor de la especificidad y de la sensibilidad del ratón al equipo de SIgA ELISA

Uso previsto

Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta de la inmunoglobulina secretor A del ratón (también conocida como sIgA) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.

Principio del análisis

Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo del sIgA del ratón. el sIgA presente en la muestra se añade y ata a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated del sIgA del ratón se añade y ata al sIgA en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo del sIgA de Biotinylated. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de sIgA del ratón. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.

Reactivo proporcionado

Precauciones

• Antes de uso, el equipo y la muestra se deben calentar naturalmente a la temperatura ambiente 30 minutos.
• Esta instrucción se debe seguir estrictamente en el experimento.
• Una vez que el número deseado de tiras se ha quitado, reselle inmediatamente el bolso para proteger el permanecer contra el deterioro. Cubra todos los reactivo cuando es parado.
• Make sure que mide con una pipeta orden y el índice de adición de bien-a-bien al medir con una pipeta los reactivo.
• La pipeta inclina y el sellador de la placa a disposición debe estar limpio y disponible evitar la contaminación cruzada.
• Evite usar los reactivo de diversos lotes juntos.
• La solución B del substrato es sensible a la luz, no expone la solución B del substrato para encenderse durante mucho tiempo.
• Pare la solución contiene el ácido. Lleve por favor la protección del ojo, de la mano y de piel al usar este material. Evite el contacto de la piel o de las membranas mucosas con el reactivo del equipo.
• El equipo no se debe utilizar más allá de la fecha de caducidad.

Preparación el reactivo

Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.

El estándar reconstituye el 120μl del estándar (64μg/ml) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 32μg/ml. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (32μg/ml) con diluyente estándar para producir las soluciones 16μg/ml, 8μg/ml, 4μg/ml y 2μg/ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 μg/ml). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:

Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.

Procedimiento de análisis

1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.

2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.

3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.

4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo anti-sIgA 10μl a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.

5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.

6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.

7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.

8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.

Cálculo del resultado

Construya una curva estándar trazando el OD medio para cada uno estándar en (y) el eje vertical contra la concentración en (x) el eje horizontal y dibuje una curva del mejor ajuste a través de los puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con software computarizado de la curva-colocación y la línea del mejor ajuste se puede determinar por análisis de regresión.