Equipo canino de Osteocalcin ELISA con alto Spesificity y sensibilidad
Cat.No E0146Ca
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo canino de OT. OT presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo canino entonces biotinylated de OT se añade y ata a OT en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated OT. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad de OT canino. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Reactivo proporcionado
| Componentes |
Cantidad |
|
Solución estándar (24ng/ml)
|
0.5ml x1 |
| Placa cubierta primero de ELISA |
12 * 8 tiras bien x1 |
| Diluyente estándar |
3ml x1 |
| Streptavidin-HRP |
6ml x1 |
| Pare la solución |
6ml x1 |
| Solución A del substrato |
6ml x1 |
| Solución B del substrato |
6ml x1 |
| Concentrado del almacenador intermediario del lavado (30x) |
20ml x1 |
| Anticuerpo canino de Biotinylated OT |
1ml x1 |
| Instrucción del usuario |
1 |
| Sellador de la placa |
2 imágenes |
| Bolso de la cremallera |
1 imagen |
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (24ng/ml) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 12ng/ml. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (12ng/ml) con diluyente estándar para producir las soluciones 6ng/ml, 3ng/ml, 1.5ng/ml y 0.75ng/ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng/ml). Cualquier solución restante se debe congelar en -20℃ y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 12ng/ml |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 6ng/ml |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 3ng/ml |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 1.5ng/ml |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 0.75ng/ml |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 24ng/ml |
12ng/ml |
6ng/ml |
3ng/ml |
1.5ng/ml |
0.75ng/ml |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Referencias
[1" expresión de alto nivel en Escherichia Coli de la hormona de crecimiento bovina biológicamente activa. “George H.J., L'Italien J.J., Pilacinski W.P., Glassman D.L., Krzyzek R.A.DNA 4:273- 281(1985)
