Equipo oxidado conejo de la lipoproteína de baja densidad ELISA con alto Spesificity y sensibilidad
Cat.No E0018Rb
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (192μg/dl) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 96μg/dl. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (96μg/dl) con diluyente estándar para producir las soluciones 48μg/dl, 24μg/dl, 12μg/dl y 6μg/dl. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 μg/dl). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 96μg/dl |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 48μg/dl |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 24μg/dl |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 12μg/dl |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 6μg/dl |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 192μg/dl |
96μg/dl |
48μg/dl |
24μg/dl |
12μg/dl |
6μg/dl |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo anti-OXLDL 10μl a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.
