96 equipo de Sensitivie DEFB4 ELISA del ratón de los pozos alto
Cat.No E1204Mo
Gama estándar de la curva: 0.05ng/ml - 10ng/ml
Sensibilidad: 0.021ng/ml
Tamaño: 96 pozos
Almacenamiento: Almacene los reactivo en 2-8°C. para el almacenamiento de seis meses excesivo refieren a la fecha de caducidad lo guardan en los ciclos repetidos Avoid del deshielo de -20°C. Si se abren los reactivo individuales se recomienda que el equipo esté utilizado en el plazo de 1 mes.
* este producto está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta del ratón 4 beta-defensin (también conocido como DEFB4) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo del ratón DEFB4. DEFB4 presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated del ratón DEFB4 se añade y ata a DEFB4 en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de Biotinylated DEFB4. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad del ratón DEFB4. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Observe
Las concentraciones de la muestra deben ser predichas antes de ser utilizado en el análisis. Si la concentración de la muestra no está dentro de la gama de la curva estándar, los usuarios deben entrarnos en contacto con para determinar la muestra óptima para sus experimentos particulares.
Las muestras que se utilizarán en el plazo de 5 días se deben almacenar en las muestras 2-8°C. se deben aliquoted o se deben almacenar en -20°C en el plazo de 1 mes o -80°C en el plazo de 6 meses. Avoid repitió ciclos hielo-deshielo.
Las muestras se deben traer a la temperatura ambiente antes de comenzar el análisis.
Centrifugadora para recoger la muestra antes de usar.
Las muestras que contienen NaN3 no pueden ser probadas mientras que inhibe la actividad de la peroxidasa (HRP) del rábano picante.
Recoja los supernatants cuidadosamente. Cuando los sedimentos ocurrieron durante almacenamiento, la centrifugación se debe realizar otra vez.
* la muestra no se puede diluir con este equipo. Debido el material utilizamos para preparar el equipo, la interferencia de matriz de la muestra puede presionar falso la especificidad y la exactitud del análisis.
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (12.8ng/ml) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 6.4ng/ml. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo el 1:2 estándar de la solución común (6.4ng/ml) con diluyente estándar para producir las soluciones 3.2ng/ml, 1.6ng/ml, 0.8ng/ml y 0.4ng/ml. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng/ml). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 6.4ng/ml | No.5 estándar | diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 3.2ng/ml | No.4 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 1.6ng/ml | No.3 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 0.8ng/ml | No.2 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 0.4ng/ml | No.1 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar | No.5 estándar | No.4 estándar | No.3 estándar | No.2 estándar | No.1 estándar |
| 12.8ng/ml | 6.4ng/ml | 3.2ng/ml | 1.6ng/ml | 0.8ng/ml | 0.4ng/ml |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Resumen
- Prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
- Añada el reactivo amplio y de ELISA en cada uno bien. Incube para 1 hora en 37°C.
Lave la placa 5 veces.
Añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos en 37°C.
Añada paran la solución y el color se convierte.
Lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
Referencias
Rivas-Santiago B., Sada E., Tsutsumi V., Aguilar-León D., Contreras J.L., Hernández-Pando R.
J. Infect. SID. 194:697- 701(2006)
