Equipo de la sensibilidad y de la especificidad ELISA para el Interleukin del ratón 2 pozos IL2 96
Cat.No E0053Mo
Gama estándar de la curva: 0.5ng/L - 200ng/L
Sensibilidad: 0.24ng/L
Tamaño: 96 pozos
Almacenamiento: Almacene los reactivo en 2-8°C. para el almacenamiento de seis meses excesivo refieren a la fecha de caducidad lo guardan en los ciclos repetidos Avoid del deshielo de -20°C. Si se abren los reactivo individuales se recomienda que el equipo esté utilizado en el plazo de 1 mes.
* este producto está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta del Interleukin 2 del ratón (también conocido como IL-2) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo del ratón IL-2. IL-2 presentan en la muestra se añaden y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces biotinylated del ratón IL-2 se añade y ata a IL-2 en la muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al Biotinylated IL-2antibody. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a la cantidad del ratón IL-2. La reacción es terminada por la adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Precisión
La precisión del Intra-análisis (precisión dentro de un análisis) tres muestras de concentración sabida fue probada en una placa para evaluar la precisión del intra-análisis.
La precisión del Inter-análisis (precisión entre los análisis) tres muestras de concentración sabida fue probada en análisis separados para evaluar la precisión del inter-análisis.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-análisis: CV<8>
Inter-análisis: CV<10>
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (240ng/L) con 120μl del diluyente estándar para generar una solución común estándar 120ng/L. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos estándar duplicados en serie diluyendo la solución común estándar (120ng/L) 1:2 con el diluyente estándar para producir las soluciones 60ng/L, 30ng/L, 15ng/L y 7.5ng/L. El diluyente estándar sirve como el estándar cero (0 ng/L). Cualquier solución restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como sigue:
| 120ng/L |
No.5 estándar |
diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 60ng/L |
No.4 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 30ng/L |
No.3 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 15ng/L |
No.2 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 7.5ng/L |
No.1 estándar |
120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar |
No.5 estándar |
No.4 estándar |
No.3 estándar |
No.2 estándar |
No.1 estándar |
| 240ng/L |
120ng/L |
60ng/L |
30ng/L |
15ng/L |
7.5ng/L |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 30x del almacenador intermediario del lavado en desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan disuelto totalmente.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo de 10μl anti-IL-2 a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.
Referencias
Wigginton J.M., parque J.W., Gruys M.E., H.A. joven, Jorcyk C.L., T.C. trasero, Brunda M.J., Strieter R.M., sala J., J.E. verde, derecha de Wiltrout.
J. Immunol. 166:1156- 1168(2001)
