96 pozos modificaron el equipo de Cys para requisitos particulares C ELISA del ser humano
Cat.No E1104Hu
Gama estándar de la curva: 0.05ng/ml - 20ng/ml
Sensibilidad: 0.028ng/ml
Tamaño: 96 pozos
Almacenamiento: Almacene los reactivo en 2-8°C. para el almacenamiento de seis meses excesivo refieren a la fecha de caducidad lo guardan en los ciclos repetidos Avoid del deshielo de -20°C. Si se abren los reactivo individuales se recomienda que el equipo esté utilizado en el plazo de 1 mes.
* este producto está para el uso de la investigación solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de usar.
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa exacta del ser humano Cystatin C (también conocida como Cys-C) en el suero, plasma, supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados del tejido.
Material requerido pero no suministrado
- Incubadora 37°C±0.5°C
- Papel absorbente
- Pipetas de la precisión y extremidades disponibles de la pipeta
- Limpie los tubos
- Desionizado o agua destilada
- Lector de Microplate con 450 el filtro de la longitud de onda del ± 10nm
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante. Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1 million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores. Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4) con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Observe
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Las concentraciones de la muestra deben ser predichas antes de ser utilizado en el análisis. Si la concentración de la muestra no está dentro de la gama de la curva estándar, los usuarios deben entrarnos en contacto con para determinar la muestra óptima para sus experimentos particulares.
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Las muestras que se utilizarán en el plazo de 5 días se deben almacenar en las muestras 2-8°C. se deben aliquoted o se deben almacenar en -20°C en el plazo de 1 mes o -80°C en el plazo de 6 meses. Avoid repitió ciclos hielo-deshielo.
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Las muestras se deben traer a la temperatura ambiente antes de comenzar el análisis.
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Centrifugadora para recoger la muestra antes de usar.
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Las muestras que contienen NaN3 no pueden ser probadas mientras que inhibe la actividad de la peroxidasa (HRP) del rábano picante.
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Recoja los supernatants cuidadosamente. Cuando los sedimentos ocurrieron durante almacenamiento, la centrifugación se debe realizar otra vez.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo anti-Cys-c 10μl a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a 1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450 nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la parada.
Referencias
Dodel R.C., Du Y., Depboylu C., Kurz A., Eastwood B., Farlow M., Oertel W.H., moleta U., Riemenschneider M.
Neurología 58:664- 664(2002)
