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Equipo en tiempo real de la polimerización en cadena del virus de Monkeypox (investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia)
Monkeypox es una enfermedad zoonótica rara caracterizada por las
erupciones de piel causadas por el virus de Monkeypox (MPV) y cuyos
síntomas clínicos son similares a la viruela. Puede ser transmitido
a través de contacto con los líquidos corporales, lesiones en la
piel o en superficies de la mucosa internas, por ejemplo en la boca
o la garganta, las gotitas respiratorias y los objetos
contaminados. La detección de DNA viral por la reacción en cadena
de polimerasa (polimerización en cadena) es la prueba preferida
para el monkeypox.
El equipo en tiempo real de la polimerización en cadena del virus
de Monkeypox se basa en tecnología en tiempo real de la
polimerización en cadena. Cuál es conveniente para la detección
cualitativa de ácidos nucléicos del virus del monkeypox extraídos
de muestras clínicas tales como esponjas nasales, esponja
orofaríngea, saliva, orina, tejido de la lesión de piel, exudado, y
sangre, etc.
Especificación
Nombre de producto | Equipo en tiempo real de la polimerización en cadena del virus de Monkeypox |
Canales de la detección | FAM |
IC | VIC |
Valor del Ct | 35 |
Límite de detección | 200 Copies/mL |
Almacenamiento | -20℃±5℃ |
Transporte | Bajo condición congelada |
Vida útil | 12 meses |
Tipo de la muestra | Esponjas nasales, esponja orofaríngea, saliva, orina, tejido de la lesión, exudado, y sangre, etc. |
Paquete | 24 pruebas/equipo, 48 pruebas/equipo, 96 pruebas/equipo |
Componentes | Almacenador intermediario de la reacción de la polimerización en cadena, mezcla de la enzima de la polimerización en cadena, control positivo, control negativo |
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Este equipo adopta la tecnología en tiempo real de la
polimerización en cadena de la fluorescencia, que es conveniente
para la detección ácida nucléica de virus del monkeypox extraída de
muestras clínicas tales como suero humano, las muestras del exudado
de la lesión y los especímenes de la esponja cada sistema de
reacción contienen las cartillas específicas y las puntas de prueba
fluorescentes para detectar el virus, y el ácido nucléico del virus
del monkeypox puede ser detectado cualitativo recogiendo la señal
fluorescente generada por la amplificación de la polimerización en
cadena.
Además, las cartillas específicas y las puntas de prueba
fluorescentes para el control estándar interno para la detección
clínica humana del espécimen se añaden a cada sistema de reacción,
y la colección, el transporte y el proceso de la extracción de la
muestra que se medirá se supervisa, indicando el falso negativo del
resultado de la prueba.
Sistema en tiempo real de la polimerización en cadena: Molarray MA-6000, ABI 7500, ViiATM 7, QuantStudio 5, QuantStudio 6/7 favorable, QuantStudio 6/7 flexión, Agilent Mx3000P/3005P, rotor-GeneTM 6000/Q, Bio-Rad CFX96 TouchTM/iQTM 5, Hongshi SLAN-96S/96P, AGS8830, AGS4800.
COMPONENTES
Especificaciones | LQ-000301 24T | LQ-000302 48T | LQ-000303 96T |
Almacenador intermediario de la reacción de la polimerización en cadena | tubo 336μL×1 | tubo 672μL×1 | tubo 672μL×2 |
Mezcla de la enzima de la polimerización en cadena | tubo 30μL×1 | tubo 50μL×1 | tubo 100μL×1 |
Control positivo | tubo 50μL×1 | tubo 100μL×1 | tubo 200μL×1 |
Control negativo | tubo 50μL×1 | tubo 100μL×1 | tubo 200μL×1 |
Instrucción para el uso (PC) | 1 | 1 | 1 |
ÍNDICE DEL FUNCIONAMIENTO DE PRODUCTO
1. sensibilidad: 200 copies/mL.
2. especificidad: Ninguna reacción cruzada con el virus del
enterovirus (EV), de sarampión (milivoltio), el virus del sarampión
(rv), el virus del Varicela-zoster (VZV), el virus de dengue
(DenV), el virus humano de Parvovirus B19 (HPVB19), de Epstein-barr
(EBv), el virus de herpes humano 6 (HHV-6), el etc.
3. precisión: ≤ el 5% del CV.
PROCEDIMIENTOS
1. Preparaciones de la muestra
La extracción de la DNA de muestras clínicas se conduce según los
requisitos y los procedimientos correspondientes en el equipo de la
extracción de la DNA del virus. Extraído
La DNA se puede utilizar directamente para la detección. Si la muestra no se detecta inmediatamente después de la extracción, debe ser almacenada en -70°C para el recurso seguro, evitando ciclos hielo-deshielo repetidos.
2. Preparación del sistema de reacción
(1) preparación del sistema: Saque el reactivo del equipo, y
permita que deshiele totalmente en la temperatura ambiente.
Invierta la mezcla y la centrifugadora inmediatamente. Reacciones
de la prueba de N (N = el número de muestras que se probarán +
control positivo + control negativo + 1) se preparan para los
sistemas de reacción, respectivamente, como sigue.
Componentes | Volumen para 1 sistema de reacción | Volumen para el sistema de reacción de N |
Almacenador intermediario de la reacción de la polimerización en cadena | 14μL | 14μLx N |
Mezcla de la enzima de la polimerización en cadena | 1μL | 1μLx N |
Volumen total | 15μL | 15μLx N |
(2) distribución de sistema de reacción: Mezcle bien el almacenador intermediario antedicho de la reacción, centrifugadora, y dispense 15μL de partes alícuotas en los tubos de la polimerización en cadena convenientes para el instrumento fluorescente de la polimerización en cadena. (Centrifugue los tubos de la polimerización en cadena en 6,000rpm para que 30s y el transporte muestreen zona del tratamiento.)
3. Cargamento de la muestra (zona del tratamiento de la muestra)
Añada la muestra ácida nucléica 10μL, el control negativo y el
control positivo a los tubos antedichos de la polimerización en
cadena respectivamente. Capsule los tubos firmemente y la
centrifugadora en 6,000rpm para 10s y entonces el transporte a la
zona de la amplificación de la polimerización en cadena.
* precaución: El adición de muestras en el orden siguiente es
recomendó: muestra ácida nucléica del control-> negativo - >
control positivo.
4. Amplificación de la polimerización en cadena (zona de la
amplificación de la polimerización en cadena)
4,1 ponga los tubos caped de la polimerización en cadena en la
máquina en tiempo real de la polimerización en cadena para la
amplificación.
4,2 ajuste de la condición del ciclo de la polimerización en cadena
de la fluorescencia
Programa | Temperatura | Duración de la reacción | Número de ciclos |
1 | 50°C | minuto 2 | 1 |
2 | 95°C | 2s | 1 |
3 | 95°C | 1s | 41 |
60°C | 13s/20s/35s |
Recoja las señales fluorescentes en el ℃ del 3:60 del paso; 35s para ABI 7500, 20s para SLAN-96S/96P, mientras que 13s para otros sistemas en tiempo real de la polimerización en cadena. El volumen total: 25μL.
4,3 disposición después de la detección
Disponga los tubos de la polimerización en cadena en un bolso
sellado después de la reacción y trate los tubos usados como
basuras médicas.
5. Ajustes para el análisis del resultado
Fije la línea de fondo en una región antes de la amplificación
exponencial donde están relativamente estables las señales
fluorescentes de todas las muestras (ningunas fluctuaciones
significativas en todas las muestras); fije el punto inicial
(número de ciclo) lejos de las fluctuaciones de la señal en
comenzar
fase de colección de la fluorescencia; fije la punto final (número
de ciclo) 1~3 ciclos antes del Ct de la primera muestra para
incorporar la amplificación exponencial. se recomiendan 4~15
ciclos.
Fije la derecha del umbral sobre el punto más alto de la curva
negativa de la amplificación del control (curva irregular del
ruido).
6. Criterios del control de calidad
Antes de evaluar los resultados del espécimen, el control positivo
y el control negativo se deben interpretar usando la tabla de la
interpretación abajo, y el control positivo y la curva negativa del
control se deben realizar correctamente, si no el resultado de la
muestra es inválido.
Canales Controles | Valor del umbral del ciclo (Ct) | |
FAM | VIC | |
Control positivo | Ct > 40 o UNDET | Ct > 40 o UNDET |
Control negativo | ≤ 35 del Ct | ≤ 35 del Ct |
7. Interpretación de los resultados de la prueba
Los canales para el virus de Monkeypox, resultado de FAM de la
detección se deben interpretar como abajo.
a) positivo: S-se forma el ≤ 38 del Ct y la curva de la
amplificación.
b) sospechó: 38 < Ct=""> 40 o ≤ nulo 35 del Ct y del Ct en el
canal de VIC para la segunda prueba.
c) negativa: Ct > 40 o ≤ nulo 35 del Ct y del Ct en el canal de
VIC.
d) contra-prueba: Ct > 40 o Ct nulo y Ct > 35 en el canal de
VIC.