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Kit de detección de ácido nucleico del virus de la viruela del mono (MPV) (método de PCR en tiempo real)
[Especificación del paquete]
50 pruebas/kit y 200 pruebas/kit
[Uso previsto]
Este kit se utiliza para la detección del virus de la viruela del
mono (MPV) en muestras de suero o exudado de lesiones mediante el
uso real
sistemas de PCR a tiempo.
[Componentes del kit de diagnóstico]
No. | Nombre del reactivo | Especificaciones y cantidad | |
50T | 200T | ||
1 | Mezcla MPV PCR | 750 μl × 1 tubo | Tubo de 750 μl × 4 |
2 | Mezcla de enzimas MPV | 200 μl × 1 tubo | Tubo de 200 μl × 4 |
3 | Control interno (CI) | 100 μl × 1 tubo | Tubo de 100 μl × 4 |
4 | Control negativo MPV | 100 μl × 1 tubo | Tubo de 100 μl × 4 |
5 | Control positivo MPV | 100 μl × 1 tubo | Tubo de 100 μl × 4 |
6 | Instrucciones | 1 porcion | 1 porcion |
[Prueba Método]
1. Reactivo Preparación(realizado a “reactivo preparación región”)
1.1 Saque cada componente del kit de diagnóstico y colóquelos a temperatura ambiente.Permita que los reactivos se equilibren a temperatura ambiente, luego agite cada uno de ellos respectivamente para su uso posterior.
1.2 Según la cantidad de muestras de prueba, control positivo MPV, control negativo MPV y control interno (IC),
Pipetee la cantidad apropiada de MPV PCR Mix y MPV Enzyme Mix (MPV PCR Mix 15 μl/test +MPV Enzyme Mix 4 μl/test +Control interno (IC) 1 μl/test), mézclelos completamente para hacer una PCR-Mastermix, centrifugue instantáneamente para uso posterior.
Nombre del reactivo | 1 muestra | 10 muestra | 25 muestra | 50 Muestra | 100 Muestra | 200 Muestra |
Mezcla MPV PCR (μl) | 15 | 150 | 375 | 750 | 1500 | 3000 |
Mezcla de enzimas MPV (μl) | 4 | 40 | 100 | 200 | 400 | 800 |
Control interno (CI) | 1 | 10 | 25 | 50 | 100 | 200 |
PCR-Mastermix | 20 | 200 | 500 | 1000 | 2000 | 4000 |
Nota: La configuración anterior es solo para su referencia y para garantizar un volumen suficiente de PCR-Mastermix, es posible que se requiera más volumen de pipeteo real. |
1.3 Transfiera los reactivos preparados anteriormente a la "región de procesamiento de muestras" para su uso posterior.
2. Procesando y cargando de especímenes (realizado a “muestra Procesando región”)
2.1 Este kit de diagnóstico no incluye el kit de extracción de ADN y ARN viral.Se recomienda utilizar el kit de extracción de ADN y ARN viral producido por Changsha Renji Medical Equipment Co., Ltd. para extraer el ADN viral.La operación específica está de acuerdo con sus instrucciones.
2.2 Agregue 20 μl de PCR-Mastermix al tubo de reacción de PCR con 5 μl de la muestra procesada anterior, el control positivo MPV y el control negativo MPV, y tape el tubo.Realice la detección de PCR cuantitativa de fluorescencia en el instrumento de PCR de fluorescencia.
3.PCR Amplificación (realizado a “nucleico acidificación área”)
3.1 Coloque los tubos de reacción de PCR en los pocillos de muestra del equipo de amplificación.Configure el control positivo MPV, el control negativo MPV y las muestras que se analizarán en la secuencia correspondiente e ingrese el nombre de la muestra.
3.2 Establezca los parámetros del ciclo de acuerdo con la siguiente tabla para la amplificación por PCR.
Pasos | Paso de reacción | La temperatura | Tiempo | Ciclos |
1 | Reacción enzimática UNG | 50℃ | 2 minutos | 1 |
2 | Reacción enzimática TAQ | 95℃ | 3 minutos | 1 |
3 | Deformación | 95℃ | 10s | 40 |
Recocido | 55℃ | 30s* |
Nota: 1) La colección de fluorescencia se establece en "Paso 3: 55 ° C, 30 s".Selección de canales de detección: FAM y Cy5, donde el canal FAM es el gen objetivo, el canal Cy5 es el gen de control interno (IC) y el sistema de reacción se establece en 25 μl.
2) Los instrumentos de PCR fluorescentes de la serie ABI no seleccionan la calibración ROX y seleccionan Ninguno para el grupo de extinción.