Método de PCR en tiempo real del equipo de detección de ácido nucleico MPV del virus de la viruela del mono

[Uso previsto]

Este kit se utiliza para la detección del virus de la viruela del mono (MPV) en muestras de suero o exudado de lesiones mediante el uso real
sistemas de PCR a tiempo.

[Principio de prueba]
El principio de la detección en tiempo real se basa en el ensayo de 5'nucleasa fluorogénica.Durante la reacción de PCR, la ADN polimerasa corta la sonda en el extremo 5' y separa el colorante informador del colorante extintor solo cuando la sonda se hibrida con el ADN objetivo.Esta escisión da como resultado la señal fluorescente generada por el colorante informador escindido, que es monitoreado en tiempo real por el sistema de detección de PCR.El ciclo de PCR en el que se detecta inicialmente un aumento en la señal de fluorescencia es proporcional a la cantidad del producto de PCR específico.La monitorización de las intensidades de fluorescencia en tiempo real permite la detección del producto acumulado sin tener que volver a abrir el tubo de reacción después de la amplificación.El kit de PCR en tiempo real del virus de la viruela del mono contiene un sistema específico listo para usar para la detección del virus de la viruela del mono mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en el sistema de PCR en tiempo real.El máster contiene reactivos y enzimas para la amplificación específica del ADN del virus de la viruela del mono.La fluorescencia es emitida y medida por la unidad óptica de los sistemas en tiempo real durante la PCR.La detección del fragmento de ADN del virus de la viruela del mono amplificado se realiza en el canal fluorimétrico FAM con el extintor de fluorescencia BHQ1.El tampón de extracción de ADN está disponible en el kit y las muestras de suero o exudado de lesiones se utilizan para la extracción del ADN.Además, el kit contiene un sistema para identificar una posible inhibición de la PCR midiendo la fluorescencia Cy5 del control interno (IC).Se suministra un control positivo externo definido como 1×10 7 copias/ml que permite determinar la carga génica.

[Componentes del kit de diagnóstico]

[Instrumento aplicable]
El kit de diagnóstico es aplicable a MA-6000, serie ABI, serie Bio-Rad, Roche LightCycler R480, Cepheid
SmartCycler, serie Rotor-Gene y otros instrumentos de PCR cuantitativa en tiempo real multicanal.

[Requisitos de muestra]
1. Tipos de muestras: suero o muestras de exudados de lesiones

2. Los especímenes pueden extraerse inmediatamente o congelarse entre -20 °C y -80 °C.

3. El transporte de muestras clínicas debe cumplir con las normas locales para el transporte de agentes etiológicos.

[El juicio de resultado de muestra]
1. Si la muestra de prueba detecta una curva de amplificación típica de tipo S en el FAM≤38, y Cy5 tiene una curva de amplificación típica, el Ctis≤38. La muestra se puede considerar positiva para MPV.

2. Si la muestra de prueba no tiene Ct o Ct > 38 en los canales FAM, y hay una curva de amplificación de tipo S típica en el canal de control interno (Cy5), el Ctis ≤38. La muestra se puede considerar negativa para MPV.

3. Si la muestra de prueba no tiene una curva de amplificación típica de tipo S (sin valor de Ct) o se detecta un valor de Ct> 38 en el FAM, y el canal Cy5 no tiene una curva de amplificación típica (sin valor de Ct) o un valor de Ct> 38, significa que hay un problema con la calidad de la muestra o un problema con la operación.Si el resultado no es válido, debe encontrar y eliminar la causa, recolectar la muestra nuevamente y repetir la prueba (si el resultado de la prueba aún no es válido, comuníquese con la compañía).

[Limitaciones del método de detección]
1. Los resultados de las pruebas del tickit de diagnóstico solo se pueden usar como referencia clínica.El diagnóstico clínico y el tratamiento de los pacientes deben considerarse junto con sus síntomas, signos, historial médico y otras condiciones relacionadas.

2. Pueden producirse resultados falsos negativos cuando la concentración del ácido nucleico detectado en la muestra de prueba está por debajo del límite mínimo de detección de este kit.

3. El manejo inadecuado de la muestra analizada durante la recolección, el transporte, el almacenamiento y el procesamiento puede provocar fácilmente la degradación del ADN y resultados falsos negativos.

4. Cuando las muestras se contaminan de forma cruzada durante la recolección, el transporte, el almacenamiento y el procesamiento, es fácil obtener resultados falsos positivos.

[Índice de rendimiento del producto]
1.LOD: El límite de detección es de 200 copias/ml.2. Precisión: Coeficiente de variación (CV%) del valor Ct de precisión dentro del lote ≤ 3%.3. Especificidad: no hay reacción cruzada entre el kit y las muestras positivas, como el virus de la viruela, el virus de la viruela vacuna, el virus de la vacuna, etc.

[Precaciones]
1. Todo el proceso de detección debe realizarse estrictamente de acuerdo con los requisitos de este manual en el área de preparación de reactivos, el área de procesamiento de muestras y el área de amplificación de PCR, y la ropa, los instrumentos y los consumibles experimentales en cada área deben usarse de forma independiente y no pueden ser mezclado.

2. Se deben establecer controles negativos y positivos para cada experimento.

3. Todos los reactivos del kit deben descongelarse por completo y mezclarse a temperatura ambiente y centrifugarse inmediatamente antes de su uso.

4. Todos los controles negativos y positivos del kit deben transferirse al área de preparación de muestras y almacenarse por separado antes del primer uso.

5. Para evitar la interferencia de la fluorescencia, evite tocar el tubo de reacción de PCR directamente con las manos y evite cualquier marca en el tubo de reacción de PCR.

6. Los parámetros relacionados con la amplificación del instrumento deben configurarse de acuerdo con los requisitos pertinentes de este manual, y no se pueden mezclar diferentes lotes de reactivos.

7. Los desechos del producto durante el experimento deben desintoxicarse antes de desecharse.

[Índice de símbolos]

[TALLER DE FÁBRICA]

[EXPORTADOR]

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Liuyang, Provincia de Hunan 410300 China

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[REPRESENTANTE AUTORIZADO]

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[PRODUCTO Y NORMAS]