Sensibilidad de diagnóstico 96Wells/Kit del nitrofurano AMOZ 0.03ppb ELISA Kit For Milk Food Safety del camarón

Kit ELISA de diagnóstico de nitrofurano AMOZ para sensibilidad a la leche 0,03 ppb 96 pozos/Kit

1.Equipo ELISA de diagnósticoPrincipio

Este kit de detección se basa en un inmunoensayo enzimático competitivo para la detección de AMOZ en muestras.Los antígenos conjugados se recubren previamente en tiras de micropocillos.El AMOZ en la muestra compite con el antígeno conjugado recubierto previamente en la tira de micropocillos por el anticuerpo anti-AMOZ.Después de agregar el conjugado enzimático, se agrega sustrato TMB para la tinción.El valor de la densidad óptica (DO) de una muestra se correlaciona negativamente con el AMOZ que contiene.Este valor se compara con una curva estándar y posteriormente se obtiene la concentración de AMOZ.

2. Especificaciones técnicas

Sensibilidad: 0.03ppb

Temperatura de incubación: 25 ℃

Tiempo de incubación: 30min~15min

Límite de detección Tejido, huevo, miel: 0,1ppb

Tasa de reacción cruzada

AMAZ 100%

AHD < 0,1 %

AOZ < 0,1 %

SEM < 0,1 %

Índice de recuperación

Tejido 80 ± 25%

Miel 75 ± 25%

Huevo 95 ± 25%

3.Kit de prueba de seguridad alimentaria ELISA de nitrofurano AMOZComponentes

4. Materiales requeridos pero no provistos
1) Equipo: lector de microplacas, impresora, homogeneizador, secador de nitrógeno, agitador vorticial, centrífuga, tubo de medición, balanza (0,01 g recíproco), incubadora, baño de agua;
2) Micropipetas: monocanal 20-200 µL, 100-1000 µL, multicanal 30-300 µl;
3) Reactivos: NaOH, acetato de etilo, n-hexano, HCl (aproximadamente 36,5 %), K2HPO4 3H2O

5. preparación de muestras

instruir
Los siguientes puntos deben abordarse antes de cualquier tipo de pretratamiento de la muestra:
1) El experimento solo puede usar puntas desechables, y las puntas deben reemplazarse al aspirar diferentes reactivos;
2) Antes del experimento, cada equipo experimental debe limpiarse y volver a limpiarse si es necesario para evitar que la contaminación interfiera con los resultados experimentales.

Preparación de la solución antes del pretratamiento de la muestra:
1) K2HPO4 0,1 M: Disolver 11,4 g de K2HPO4 3H2O en agua desionizada hasta 500 mL.
2) HCl 1 M: disuelva 8,6 ml de HCl (alrededor del 36,5 %) en agua desionizada hasta obtener 100 ml.
3) NaOH 1 M: Disolver 4 g de NaOH en agua desionizada hasta 100 mL.
4) Diluya la solución de redisolución concentrada 2x con agua desionizada a razón de 1:1 (1 ml de solución de redisolución concentrada + 1 ml de agua desionizada) para volver a disolver la muestra.

5.1 Preparación de muestras

a)Tejido, huevos
1) Pesar 1±0,05 g de muestra homogénea, agregar 4 ml de agua destilada, 0,5 ml de HCl 1 M y 100 µl de 2-nitrobenzaldehído (C7H5NO3) a cada tubo y agitar adecuadamente durante 2 minutos;
2) Incubar durante la noche a 37°C (alrededor de 16 horas) o en un baño de agua a 56°C (2 horas).
3) Agregue 5 ml de K2HPO4 0,1 M, 0,4 ml de NaOH 1 M y 6 ml de acetato de etilo a cada tubo y agite durante 30 segundos.
4) Centrifugar a temperatura ambiente (20-25°C) por encima de 4000r/min durante 10min (si hay emulsificación o la capa de acetato de etilo es inferior a 3ml, incubar la muestra en baño maría a 80°C durante 10min, y centrifugar repetidamente; o aumentar la velocidad y prolongar el tiempo de centrifugado).
5) Transfiera la capa de acetato de etilo de 3 ml a un tubo de centrífuga nuevo y evapore hasta sequedad con nitrógeno o aire a 50 °C.
6) Disolver el residuo seco en 2 mL de n-hexano, agregar 1 mL de la solución reconstituida diluida, mezclar bien por 30 segundos, centrifugar a temperatura ambiente (20-25°C) a una velocidad superior a 4000 rpm por 10 minutos;eliminar la fase superior de n-hexano.(Si se produce emulsificación, retire la fase superior de n-hexano, incube la muestra en un baño de agua a 70°C durante 10-20 min y centrifugue repetidamente).
7) Tome 50 µL de la capa inferior para su análisis.
Factor de dilución de la muestra: 2

b) miel
1) Pesar 2±0,05 g de muestra homogénea (miel), agregar 4 ml de agua destilada, 0,5 ml de HCl 1 M y 100 µl de 2-nitrobenzaldehído (C7H5NO3) a cada tubo, agitar adecuadamente durante 2 minutos;
2) Incubar durante la noche a 37°C (alrededor de 16 horas) o en un baño de agua a 56°C (2 horas).
3) Agregue 5 ml de K2HPO4 0,1 M, 0,4 ml de NaOH 1 M y 6 ml de acetato de etilo a cada tubo y agite durante 30 segundos.
4) Centrifugar a temperatura ambiente (20-25°C) por encima de 4000r/min durante 10min (si hay emulsificación o la capa de acetato de etilo es inferior a 3ml, centrifugar la muestra repetidamente en baño maría a 80°C durante 10min; o aumentar la velocidad y prolongar el tiempo de centrifugado).
5) Transfiera la capa de acetato de etilo de 3 ml a un tubo de centrífuga nuevo y evapore hasta sequedad con nitrógeno o aire a 50 °C.
6) Disolver el residuo seco en 2 mL de n-hexano, agregar 1 mL de solución reconstituida diluida, mezclar bien por 30 segundos, centrifugar a temperatura ambiente (20-25°C) a una velocidad de 4000 r/min o más por 10 minutos;eliminar la fase superior de n-hexano.(Si se produce emulsificación, retire la fase superior de n-hexano, incube la muestra en un baño de agua a 70°C durante 10-20 min y centrifugue repetidamente).
7) Tome 50 µL de la capa inferior para su análisis.
Factor de dilución de la muestra: 1

6. Procedimiento ELISA

6.1 Descripción
1) Lleve todos los reactivos y tiras de micropocillos a temperatura ambiente (20-25°C) antes de su uso;
2) Vuelva a poner todos los reactivos a 2-8°C inmediatamente después de su uso;
3) La reproducibilidad de los ensayos ELISA depende en gran medida de la consistencia del lavado de las placas.El correcto funcionamiento del lavado de placas es la clave del procedimiento ELISA;
4) Durante la incubación a temperatura constante, todas las muestras y reactivos deben protegerse de la luz, y cada microplaca debe sellarse con una película protectora.

6.2 Procedimiento operativo
1) Ponga el kit a temperatura ambiente (20-25°C) durante al menos 30 minutos, tenga en cuenta que cada reactivo debe agitarse y mezclarse bien antes de usarlo, y coloque las tiras de micropocillos requeridas en el marco de la placa.Las microplacas no utilizadas deben volver a sellarse y almacenarse a 2-8 °C, no congelarse.
2) Preparación de la solución: 40 ml de tampón de lavado concentrado 20 × diluido 1:19 con agua desionizada (1 parte de tampón de lavado concentrado 20 × + 19 partes de agua desionizada).O preparar según sea necesario.
3) Numeración: numere los micropocillos de acuerdo con las muestras y las soluciones estándar;cada muestra y solución estándar se debe hacer por duplicado y se deben registrar sus posiciones.
4) Agregue 50 µL de muestra o solución estándar para separar los pocillos duplicados;agregue 50 ul de enzima conjugada a cada pocillo, luego agregue 50 µl de solución de trabajo de anticuerpos y agite la placa con la mano para mezclar suavemente.Selle la microplaca con una película protectora e incube a 25 °C durante 30 minutos.
5) Vierta el líquido en el micropocillo, seque con papel absorbente, agregue 250 µL/pocillo de tampón de lavado para lavar la placa de micropocillos durante 15-30 segundos, luego retire y seque con papel absorbente, repita 4-5 veces.(Si hay burbujas de aire después de golpear, córtelas con una punta limpia).
6) Desarrollo de color: agregue 50 µL de Sustrato A a cada pocillo, seguido de 50 µL de Sustrato B. Mezcle suavemente agitando la placa con la mano, luego incube en la oscuridad a 25 °C durante 15 min para desarrollar el color.
7) Ensayo: Agregue 50 μL de solución de parada a cada pocillo.Mezclar suavemente agitando la placa con la mano.Establezca la longitud de onda del lector de microplacas en 450 nm para determinar el valor de OD de cada pocillo.(Se recomienda leer los valores de OD en longitudes de onda duales de 450/630nm en 5 minutos).

7. Juicio de resultado

Existen dos métodos para juzgar los resultados: el primero es el juicio aproximado, mientras que el segundo es la determinación cuantitativa.Tenga en cuenta que el valor de OD de la muestra tiene una correlación negativa con la concentración de AMOZ.

7.1 Determinación cualitativa

El rango de concentración (ng/mL) de AMOZ se puede obtener comparando el valor promedio de OD de la muestra con el de la solución estándar.Suponiendo que el valor de la DO de la muestraⅠ es 0,3 y el de la muestraⅡ es 1,0, el valor de la DO de las soluciones estándar es: 2,243 para 0 ppb, 1,816 para 0,03 ppb, 1,415 para 0,09 ppb, 0,74 para 0,27 ppb, 0,313 para 0,81 ppb , 0,155 para 2,43 ppb, por lo que el rango de concentración de la muestraⅠ es de 0,81 a 2,43 ppb y el de la muestraⅡ es de 0,09 a 0,27 ppb.

7.2 Determinación cuantitativa

Los valores medios de los valores de absorbancia se obtienen del valor promedio de DO (B) de la muestra y la solución estándar dividido por el valor de DO (B0) de la primera solución estándar (0 estándar) y luego multiplicado por 100%, es decir ,

B: el valor promedio de OD de la muestra o la solución estándar

B0: el valor promedio de OD de la solución estándar de 0 ng/mL

Dibuje la curva estándar con los porcentajes de absorción de la solución estándar y los valores de semilogaritmo de la solución estándar AMOZ (ng/mL) como eje Y y X, respectivamente.Lea la concentración correspondiente de la muestra de la curva estándar incorporando su porcentaje de absorción en la curva estándar.El valor resultante se multiplica posteriormente por el pliegue de dilución correspondiente, obteniendo finalmente la concentración de AMOZ en la muestra.

8. Asuntos que requieren atención
1) La temperatura ambiente es inferior a 25 ℃ o la temperatura del reactivo y la muestra no han regresado a la temperatura ambiente (20-25 ℃), lo que hará que el valor estándar de OD disminuya.
2) Durante el proceso de lavado, el secado de la microplaca estará acompañado por la no linealidad de la curva estándar y la reproducibilidad insatisfactoria;por lo tanto, continúe con el siguiente paso inmediatamente después del lavado.
3) Mezclar bien, de lo contrario habrá mala reproducibilidad.
4) La solución de parada es una solución de ácido sulfúrico 2 M, evite el contacto con la piel.
5) No utilice el kit más allá de la fecha de caducidad.El uso de reactivos diluidos o adulterados del kit puede provocar cambios en la sensibilidad y los valores de detección de OD.No reemplace los reactivos de diferentes lotes de kits.
6) Vuelva a sellar las microplacas no utilizadas en bolsas autosellantes.Las soluciones estándar y los acopladores incoloros son sensibles a la luz y no pueden exponerse directamente a la luz.
7) Deseche cualquier solución de tinte cuyo color indique que la solución se ha degradado.Un valor de detección inferior a 0,5 para la solución estándar 1 (0 ppb) indica degradación.
8) La temperatura de reacción óptima es de 25 ℃, y la sensibilidad de detección y el valor de OD cambiarán si la temperatura es demasiado alta o demasiado baja.

9. Periodo de conservación y validez
Almacenamiento: Conservar a 2-8°C, no congelar.
Fecha de caducidad: 12 meses;la fecha de producción está en la caja.
Nota: Si el empaque al vacío de la microplaca tiene fugas, aún se puede usar sin afectar los resultados de la prueba, por lo que puede usarlo con confianza.

P1: ¿Cuándo se enviará?
A1: le enviaremos los productos lo antes posible dentro de los 7 días hábiles posteriores a la recepción del pago.(En caso de factores externos como la epidemia, la entrega puede retrasarse)

P2: ¿Es compatible con OEM/ODM?
A2: Puede admitirse, pero la cantidad específica debe ser superior a 100.000 piezas, lo cual es conveniente para productos personalizados.

P3: ¿Cómo le está yendo a su fábrica en términos de control de calidad?
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