Método del ratón E cad E Cadherin Elisa Kit Research Use Only Sandwich

Ratón E-Cadherin, E-cad ELISA Kit

Este equipo de ELISA utiliza el bocadillo-ELISA como el método. El stripplate de Microelisa proporcionado en este equipo se ha cubierto primero con un anticuerpo específico al E-cad. Los estándares o las muestras se añaden a los pozos apropiados del stripplate de Microelisa y combinaron al anticuerpo específico. Entonces una peroxidasa del rábano picante (HRP) - anticuerpo conjugado específico para el E-cad se añade a cada stripplate de Microelisa bien y se incuba. Se quitan los componentes libres. La solución del substrato de TMB se añade a cada pozo. Solamente esos pozos que contienen el E-cad y el anticuerpo conjugado HRP E-cad aparecerán azules en color y después darán vuelta amarillo después de la adición de la solución de la parada. La densidad óptica (OD) se mide espectrofotométrico en una longitud de onda de 450 nanómetro. El valor del OD es proporcional a la concentración de E-cad. Usted puede calcular la concentración de E-cad en las muestras comparando el OD de las muestras a la curva estándar.

Materiales proporcionados el equipo

Procedimiento

Dilución de estándares

los pozos 1.Ten se fijan para los estándares en un stripplate de Microelisa. En bien 1 y bien 2, la solución estándar 100μl y el almacenador intermediario estándar del dilución 50μl se añaden y se mezclan bien. En bien 3 y bien 4, la solución 100μl de bien 1 y 2 se añade bien respectivamente. Después el almacenador intermediario estándar del dilución 50μl se añade y se mezcla bien. la solución 50μl se desecha del pozo 3 y bien 4. En bien 5 y bien 6, la solución 50μl de bien 3 y 4 se añade bien respectivamente. Después el almacenador intermediario estándar del dilución 50μl se añade y se mezcla bien. En bien 7 y bien 8, la solución 50μl de bien 5 y 6 se añade bien respectivamente. Después el almacenador intermediario estándar del dilución 50μl se añade y se mezcla bien. En bien 9 y bien 10, la solución 50μl de bien 7 y 8 se añade bien respectivamente. Después el almacenador intermediario estándar del dilución 50μl se añade y se mezcla bien. la solución 50μl se desecha del pozo 9 y bien 10. Después del dilución, el volumen total en todos los pozos es 50μl y las concentraciones son 24ng/ml, 16 ng/ml, 8 ng/ml, 4ng/ml y 2ng/ml, respectivamente.

2. En el stripplate de Microelisa, deje un pozo vacío como control en blanco. En pozos de la muestra, se añade el almacenador intermediario del dilución de la muestra 40μl y la muestra 10μl (el factor del dilución es 5). Las muestras se deben cargar sobre la parte inferior sin el tacto de la pared bien. Mézclese bien con la sacudida apacible.

3. Incubación: incube el minuto 30 en 37℃ después de sellado con la membrana de la placa de cierre.

4. Dilución: diluya el almacenador intermediario que se lava concentrado con el agua destilada (30 veces para 96T y 20 veces para 48T).

5. Lavado: pele cuidadosamente apagado la membrana de la placa de cierre, aspírela y rellénela con la solución del lavado. Deseche la solución del lavado después de descansar por 30 segundos. Repita la procedura por 5 veces.

6. Añada el reactivo de la HRP-conjugación de 50 μl a cada pozo excepto el control en blanco bien.

7. Incubación según lo descrito en el paso 3.

8. Lavado según lo descrito en el paso 5.

9. Colorante: Añada la solución A del cromógeno de 50 μl y la solución B a cada pozo, mezcla del cromógeno de 50 μl con suavemente la sacudida e incube en 37℃ por 15 minutos. Evite por favor la luz durante el colorante.

10. Terminación: añada 50 que el μl para la solución a cada pozo para terminar la reacción. El color en el pozo debe cambiar de azul para amarillear.

11. Absorción leída O.D. en 450nm usando un lector de la placa de microtítulo. El valor del OD del control en blanco se fija bien como cero. El análisis se debe realizar en el plazo de 15 minutos después de añadir para la solución.

Precisión

precisión del Intra-análisis (precisión dentro de un análisis): 3 muestras con el E-cad bajo, medio y de alto nivel fueron probadas 20 veces en una placa, respectivamente.

precisión del Inter-análisis (precisión entre los análisis): 3 muestras con el E-cad bajo, medio y de alto nivel fueron probadas en 3 diversas placas, 8 réplicas en cada placa.

CV (%) = SD/meanX100

Intra-análisis: CV<10>

Inter-análisis: CV<12>

Gama del análisis

0.6pg/ml -80pg/ml

Sensibilidad:

0,1 pg/ml

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