Add to Cart
El equipo fuerte humano del bocadillo ELISA de Angiopoietin 4 de la
sensibilidad y de la especificidad modificó la placa de 96 pozos
para requisitos particulares
Cat.No E1263Hu
Gama estándar de la curva: 15ng/L - 3000ng/L
Sensibilidad: 7.73ng/L
Tamaño: 96 pozos
Principio del análisis
Este equipo de la prueba del elisa es un análisis Enzima-ligado del
inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el
anticuerpo humano ANG-4. ANG-4 presentan en la muestra se añaden y
atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo
humano entonces biotinylated ANG-4 se añade y ata a ANG-4 en la
muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de
Biotinylated ANG-4. Después de la incubación Streptavidin-HRP
desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del
substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a
la cantidad de ANG-4 humano. La reacción es terminada por la
adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450
nanómetro.
el producto de los *This está para el uso de la investigación
solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Es
recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes de
usar.
Precauciones
Preparación el reactivo
Todos los reactivo se deben traer a la temperatura ambiente antes
de usar.
El estándar reconstituye el 120μl del estándar (3200ng/L) con 120μl del
diluyente estándar para generar una solución común estándar
1600ng/L. Permita que el estándar se siente por 15 minutos con la
agitación apacible antes de hacer diluciones. Prepare los puntos
estándar duplicados en serie diluyendo la solución común estándar
(1600ng/L) 1:2 con el diluyente estándar para producir las
soluciones 800ng/L, 400ng/L, 200ng/L y 100ng/L. El diluyente
estándar sirve como el estándar cero (0 ng/L). Cualquier solución
restante se debe congelar en -20°C y utilizar en el plazo de un
mes. El dilución de las soluciones estándar sugeridas es como
sigue:
| 1600ng/L | No.5 estándar | diluyente original del estándar 120μl + del estándar 120μl |
| 800ng/L | No.4 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.5 + 120μl |
| 400ng/L | No.3 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.4 + 120μl |
| 200ng/L | No.2 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.3 + 120μl |
| 100ng/L | No.1 estándar | 120μl estándar diluyente del estándar No.2 + 120μl |
| Concentración estándar | No.5 estándar | No.4 estándar | No.3 estándar | No.2 estándar | No.1 estándar |
| 3200ng/L | 1600ng/L | 800ng/L | 400ng/L | 200ng/L | 100ng/L |
Almacenador intermediario 20ml diluído del lavado del concentrado 25x del almacenador intermediario del lavado en
desionizado o agua destilada para rendir 500 ml de almacenador
intermediario del lavado 1x. Si los cristales han formado en el
concentrado, mezcla suavemente hasta que los cristales hayan
disuelto totalmente.
Procedimiento de análisis
1. prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según
lo dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura
ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura
ambiente.
2. determine el número de tiras requeridas para el análisis.
Inserte las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas
se deben almacenar en 2-8°C.
3. añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución
estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada
el anticuerpo de 10μl anti-ANG-4 a los pozos de la muestra, después
añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar
(pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra
la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador
intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el
almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a
1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire
todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del
lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del
lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro
material absorbente.
6. añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después
añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la
placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la
oscuridad.
7. añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul
cambiará en amarillo inmediatamente.
8. determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo
inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450
nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la
parada.
Resumen
1. prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
2. añada la muestra y el reactivo de ELISA en cada uno bien. Incube
para 1 hora en 37°C.
3. lave la placa 5 veces.
4. añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos
en 37°C.
5. añada paran la solución y el color se convierte.
6. lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
Cálculo del resultado
Construya una curva estándar trazando el OD medio para cada uno
estándar en (y) el eje vertical contra la concentración en (x) el
eje horizontal y dibuje una curva del mejor ajuste a través de los
puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con
software computarizado de la curva-colocación y la línea del mejor
ajuste se puede determinar por análisis de regresión.