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Alto reforzador sensible humano del conector del equipo de CNKSR1
ELISA del supresor de la cinasa de Ras 1 equipo del análisis de
ELISA
Cat.No E6627Hu
Precauciones
Precisión
La precisión del Intra-análisis (precisión dentro de un análisis)
tres muestras de concentración sabida fue probada en una placa para
evaluar la precisión del intra-análisis.
La precisión del Inter-análisis (precisión entre los análisis) tres
muestras de concentración sabida fue probada en análisis separados
para evaluar la precisión del inter-análisis.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-análisis: CV<8>
Inter-análisis: CV<10>
Principio del análisis
Este equipo del bocadillo ELISA es un análisis Enzima-ligado del
inmunosorbente (ELISA). La placa se ha cubierto primero con el
anticuerpo humano CNKSR1. CNKSR1 presentan en la muestra se añaden
y atan a los anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo
humano entonces biotinylated CNKSR1 se añade y ata a CNKSR1 en la
muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al anticuerpo de
Biotinylated CNKSR1. Después de la incubación Streptavidin-HRP
desatado se quita durante un paso que se lava. La solución del
substrato entonces se añade y el color se convierte en proporción a
la cantidad de CNKSR1 humano. La reacción es terminada por la
adición de ácido para la solución y la absorción se mide en 450
nanómetro.
Uso previsto
Este equipo del bocadillo está para la detección cuantitativa
exacta de reforzador humano del conector del supresor de la cinasa
de Ras 1 (también conocido como CNKSR1) en el suero, plasma,
supernates del cultivo celular, lysates de la célula, homogenados
del tejido.
Reactivo proporcionado
Componentes | Cantidad |
Solución estándar (1600ng/L) | 0.5ml x1 |
Placa cubierta primero de ELISA | 12 * 8 tiras bien x1 |
Diluyente estándar | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Pare la solución | 6ml x1 |
Solución A del substrato | 6ml x1 |
Solución B del substrato | 6ml x1 |
Concentrado del almacenador intermediario del lavado (25x) | 20ml x1 |
Anticuerpo humano CNKSR1 de Biotinylated | 1ml x1 |
Instrucción del usuario | 1 |
Sellador de la placa | 2 imágenes |
Bolso de la cremallera | 1 imagen |
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura
ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante.
Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C
en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y
cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos
antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes.
Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja
los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro
de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de
la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1
million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo
repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores.
Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
El tejido y otros fluídos corporales aclaran tejidos en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a
fondo y para pesar antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4)
con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o
congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos.
el *Sample no se puede diluir con este equipo. Debido el material
utilizamos para preparar el equipo, la interferencia de matriz de
la muestra puede presionar falso la especificidad y la exactitud
del análisis.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo
dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura
ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura
ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte
las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben
almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución
estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el
anticuerpo de 10μl anti-CNKSR1 a los pozos de la muestra, después
añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar
(pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra
la placa con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador
intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el
almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a
1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire
todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del
lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del
lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro
material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después
añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la
placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la
oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul
cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo
inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450
nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la
parada.