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Equipo trenzado Anti-doble de la DNA DS-DNA ELISA del ratón de la
alta precisión y de la especificidad de 96 Wells
Cat.No E0139Mo
Gama estándar de la curva: 0.5ng/ml - 200ng/ml
Sensibilidad: 0.25ng/ml
Tamaño: 96 pozos
el producto de los *This está para el uso de la investigación
solamente, no para el uso en procedimientos de la diagnosis. Itis
recomienda altamente leer esta instrucción totalmente antes del
uso.
Precisión
La precisión del Intra-análisis (precisión dentro de un análisis)
tres muestras de concentración sabida fue probada en una placa para
evaluar la precisión del intra-análisis.
La precisión del Inter-análisis (precisión entre los análisis) tres
muestras de concentración sabida fue probada en análisis separados
para evaluar la precisión del inter-análisis.
CV (%) = SD/mean x 100
Intra-análisis: CV<8>
Inter-análisis: CV<10>
Principio del análisis
Este equipo es un análisis Enzima-ligado del inmunosorbente
(ELISA). La placa se ha cubierto primero con el anticuerpo del
ratón DS-DNA. DS-DNA presentan en la muestra se añaden y atan a los
anticuerpos cubiertos en los pozos. Y el anticuerpo entonces
biotinylated del ratón DS-DNA se añade y ata a DS-DNA en la
muestra. Después Streptavidin-HRP se añade y ata al Biotinylated
DS-DNAantibody. Después de la incubación Streptavidin-HRP desatado
se quita durante un paso que se lava. La solución del substrato
entonces se añade y el color se convierte en proporción a la
cantidad del ratón DS-DNA. La reacción es terminada por la adición
de ácido para la solución y la absorción se mide en 450 nanómetro.
Reactivo proporcionado
Componentes | Cantidad |
Solución estándar (240ng/ml) | 0.5ml x1 |
Placa cubierta primero de ELISA | 12 * 8 tiras bien x1 |
Diluyente estándar | 3ml x1 |
Streptavidin-HRP | 6ml x1 |
Pare la solución | 6ml x1 |
Solución A del substrato | 6ml x1 |
Solución B del substrato | 6ml x1 |
Concentrado del almacenador intermediario del lavado (30x) | 20ml x1 |
Anticuerpo del ratón DS-DNA de Biotinylated | 1ml x1 |
Instrucción del usuario | 1 |
Sellador de la placa | 2 imágenes |
Bolso de la cremallera | 1 imagen |
Material requerido pero no suministrado
Colección de espécimen
El suero permite que el suero coagule por 10-20 minutos en la temperatura
ambiente. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por 20 minutos.
El plasma recoge plasma usando el EDTA o la heparina como anticoagulante.
Centrifugue las muestras por 15 minutos en 2000-3000 RPM en 2 - 8°C
en el plazo de 30 minutos de la colección.
La orina recoge por el tubo estéril. Centrifugadora en 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos. Al recoger el líquido flúido y
cerebroespinal pleuroperitoneal, siga por favor los procedimientos
antedichos.
El sobrenadante del cultivo celular recoge por los tubos estéril al examinar secrete los componentes.
Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos. Recoja
los supernatants cuidadosamente. Al examinar los componentes dentro
de la célula, utilice PBS (pH 7.2-7.4) para diluir la suspensión de
la célula a la concentración de la célula de aproximadamente 1
million/ml. Dañe las células durante ciclos hielo-deshielo
repetidos para dejar hacia fuera los componentes interiores.
Centrifugue en 2000-3000 RPM por aproximadamente 20 minutos.
Tejidos de la aclaración del tejido en PBS (pH 7,4) para quitar exceso de sangre a fondo y a pesar
antes de la homogeneización. Pique los tejidos y homogenéicelos en PBS (pH7.4)
con un homogeneizador de cristal en el hielo. Deshiele en 2-8°C o
congele en la centrifugadora de -20°C. en 2000-3000 RPM por
aproximadamente 20 minutos.
el *Sample no se puede diluir con este equipo. Debido el material
utilizamos para preparar el equipo, la interferencia de matriz de
la muestra puede presionar falso la especificidad y la exactitud
del análisis.
Procedimiento de análisis
1. Prepare todos los reactivo, soluciones estándar y muestras según lo
dado instrucciones. Traiga todos los reactivo a la temperatura
ambiente antes de usar. El análisis se realiza en la temperatura
ambiente.
2. Determine el número de tiras requeridas para el análisis. Inserte
las tiras en los marcos para el uso. Las tiras inusitadas se deben
almacenar en 2-8°C.
3. Añada el estándar 50μl al estándar bien. Nota: No añada el anticuerpo al estándar bien porque la solución
estándar contiene el anticuerpo biotinylated.
4. Añada la muestra 40μl a los pozos de la muestra y entonces añada el anticuerpo de la anti-DS-DNA 10μl a los pozos de la muestra, después añada el streptavidin-HRP 50μl a los pozos y a los pozos estándar (pozo de la muestra del control no en blanco). Mézclese bien. Cubra la placa
con un sellador. Incube 60 minutos en 37°C.
5. Quite el sellador y lave la placa 5 veces con el almacenador
intermediario del lavado. Empape los pozos con por lo menos el
almacenador intermediario del lavado de 0,35 ml para 30 segundos a
1 minuto para cada Washington. Para el lavado automatizado, aspire
todos los pozos y lave 5 veces con el almacenador intermediario del
lavado, sobrellenando mana con el almacenador intermediario del
lavado. Borre la placa sobre las toallas de papel o el otro
material absorbente.
6. Añada la solución A del substrato 50μl a cada uno pozo y después
añada la solución B del substrato 50μl a cada uno bien. Incube la
placa cubierta con un nuevo sellador por 10 minutos en 37°C en la
oscuridad.
7. Añada 50μl paran la solución a cada uno bien, el color azul
cambiará en amarillo inmediatamente.
8. Determine la densidad óptica (valor del OD) de cada uno pozo
inmediatamente usando un sistema del lector del microplate a 450
nanómetro dentro de 10 minués después de añadir la solución de la
parada.
Resumen
1. Prepare todos los reactivo, muestras y estándares.
2. Añada la muestra y el reactivo de ELISA en cada uno bien. Incube
para 1 hora en 37°C.
3. Lave la placa 5 veces.
4. Añada la solución A y B. Incubate del substrato por 10 minutos en
37°C.
5. Añada paran la solución y el color se convierte.
6. Lea el valor del OD en el plazo de 10 minutos.
Cálculo del resultado
Construya una curva estándar trazando el OD medio para cada uno
estándar en (y) el eje vertical contra la concentración en (x) el
eje horizontal y dibuje una curva del mejor ajuste a través de los
puntos en el gráfico. Estos cálculos se pueden realizar mejor con
software computarizado de la curva-colocación y la línea del mejor
ajuste se puede determinar por análisis de regresión.