Equipo en tiempo real de la polimerización en cadena del virus de Monkeypox (investigación de la Polimerización en cadena-fluorescencia)
Monkeypox es una enfermedad zoonótica rara caracterizada por las erupciones de piel causadas por el virus de Monkeypox (MPV) y cuyos síntomas clínicos son similares a la viruela. Puede ser transmitido a través de contacto con los líquidos corporales, lesiones en la piel o en superficies de la mucosa internas, por ejemplo en la boca o la garganta, las gotitas respiratorias y los objetos contaminados. La detección de DNA viral por la reacción en cadena de polimerasa (polimerización en cadena) es la prueba preferida para el monkeypox.
El equipo en tiempo real de la polimerización en cadena del virus de Monkeypox se basa en tecnología en tiempo real de la polimerización en cadena. Cuál es conveniente para la detección cualitativa de ácidos nucléicos del virus del monkeypox extraídos de muestras clínicas tales como esponjas nasales, esponja orofaríngea, saliva, orina, tejido de la lesión de piel, exudado, y sangre, etc.
Especificación
| Nombre de producto |
Equipo en tiempo real de la polimerización en cadena del virus de Monkeypox |
| Canales de la detección |
FAM |
| IC |
VIC |
| Valor del Ct |
35 |
| Límite de detección |
200 Copies/mL |
| Almacenamiento |
-20℃±5℃ |
| Transporte |
Bajo condición congelada |
| Vida útil |
12 meses |
| Tipo de la muestra |
Esponjas nasales, esponja orofaríngea, saliva, orina, tejido de la lesión, exudado, y sangre, etc. |
| Paquete |
24 pruebas/equipo, 48 pruebas/equipo, 96 pruebas/equipo |
| Componentes |
Almacenador intermediario de la reacción de la polimerización en cadena, mezcla de la enzima de la polimerización en cadena, control positivo, control negativo |
PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Este equipo adopta la tecnología en tiempo real de la polimerización en cadena de la fluorescencia, que es conveniente para la detección ácida nucléica de virus del monkeypox extraída de muestras clínicas tales como suero humano, las muestras del exudado de la lesión y los especímenes de la esponja cada sistema de reacción contienen las cartillas específicas y las puntas de prueba fluorescentes para detectar el virus, y el ácido nucléico del virus del monkeypox puede ser detectado cualitativo recogiendo la señal fluorescente generada por la amplificación de la polimerización en cadena.
Además, las cartillas específicas y las puntas de prueba fluorescentes para el control estándar interno para la detección clínica humana del espécimen se añaden a cada sistema de reacción, y la colección, el transporte y el proceso de la extracción de la muestra que se medirá se supervisa, indicando el falso negativo del resultado de la prueba.
INSTRUMENTO APLICABLE
Sistema en tiempo real de la polimerización en cadena: Molarray MA-6000, ABI 7500, ViiATM 7, QuantStudio 5, QuantStudio 6/7 favorable, QuantStudio 6/7 flexión, Agilent Mx3000P/3005P, rotor-GeneTM 6000/Q, Bio-Rad CFX96 TouchTM/iQTM 5, Hongshi SLAN-96S/96P, AGS8830, AGS4800.
COMPONENTES
| Especificaciones |
LQ-000301
24T |
LQ-000302
48T |
LQ-000303
96T |
| Almacenador intermediario de la reacción de la polimerización en cadena |
tubo 336μL×1 |
tubo 672μL×1 |
tubo 672μL×2 |
| Mezcla de la enzima de la polimerización en cadena |
tubo 30μL×1 |
tubo 50μL×1 |
tubo 100μL×1 |
| Control positivo |
tubo 50μL×1 |
tubo 100μL×1 |
tubo 200μL×1 |
| Control negativo |
tubo 50μL×1 |
tubo 100μL×1 |
tubo 200μL×1 |
| Instrucción para el uso (PC) |
1 |
1 |
1 |
ÍNDICE DEL FUNCIONAMIENTO DE PRODUCTO
1. sensibilidad: 200 copies/mL.
2. especificidad: Ninguna reacción cruzada con el virus del enterovirus (EV), de sarampión (milivoltio), el virus del sarampión (rv), el virus del Varicela-zoster (VZV), el virus de dengue (DenV), el virus humano de Parvovirus B19 (HPVB19), de Epstein-barr (EBv), el virus de herpes humano 6 (HHV-6), el etc.
3. precisión: ≤ el 5% del CV.
PROCEDIMIENTOS
1. Preparaciones de la muestra
La extracción de la DNA de muestras clínicas se conduce según los requisitos y los procedimientos correspondientes en el equipo de la extracción de la DNA del virus. Extraído
La DNA se puede utilizar directamente para la detección. Si la muestra no se detecta inmediatamente después de la extracción, debe ser almacenada en -70°C para el recurso seguro, evitando ciclos hielo-deshielo repetidos.
2. Preparación del sistema de reacción
(1) preparación del sistema: Saque el reactivo del equipo, y permita que deshiele totalmente en la temperatura ambiente. Invierta la mezcla y la centrifugadora inmediatamente. Reacciones de la prueba de N (N = el número de muestras que se probarán + control positivo + control negativo + 1) se preparan para los sistemas de reacción, respectivamente, como sigue.
| Componentes |
Volumen para 1 sistema de reacción |
Volumen para el sistema de reacción de N |
| Almacenador intermediario de la reacción de la polimerización en cadena |
14μL |
14μLx N |
| Mezcla de la enzima de la polimerización en cadena |
1μL |
1μLx N |
| Volumen total |
15μL |
15μLx N |
(2) distribución de sistema de reacción: Mezcle bien el almacenador intermediario antedicho de la reacción, centrifugadora, y dispense 15μL de partes alícuotas en los tubos de la polimerización en cadena convenientes para el instrumento fluorescente de la polimerización en cadena. (Centrifugue los tubos de la polimerización en cadena en 6,000rpm para que 30s y el transporte muestreen zona del tratamiento.)
3. Cargamento de la muestra (zona del tratamiento de la muestra)
Añada la muestra ácida nucléica 10μL, el control negativo y el control positivo a los tubos antedichos de la polimerización en cadena respectivamente. Capsule los tubos firmemente y la centrifugadora en 6,000rpm para 10s y entonces el transporte a la zona de la amplificación de la polimerización en cadena.
* precaución: El adición de muestras en el orden siguiente es
recomendó: muestra ácida nucléica del control-> negativo - > control positivo.
4. Amplificación de la polimerización en cadena (zona de la amplificación de la polimerización en cadena)
4,1 ponga los tubos caped de la polimerización en cadena en la máquina en tiempo real de la polimerización en cadena para la amplificación.
4,2 ajuste de la condición del ciclo de la polimerización en cadena de la fluorescencia
| Programa |
Temperatura |
Duración de la reacción |
Número de ciclos |
|
1
|
50°C |
minuto 2 |
1 |
| 2 |
95°C |
2s |
1 |
| 3 |
95°C |
1s |
41 |
| 60°C |
13s/20s/35s |
Recoja las señales fluorescentes en el ℃ del 3:60 del paso; 35s para ABI 7500, 20s para SLAN-96S/96P, mientras que 13s para otros sistemas en tiempo real de la polimerización en cadena. El volumen total: 25μL.
4,3 disposición después de la detección
Disponga los tubos de la polimerización en cadena en un bolso sellado después de la reacción y trate los tubos usados como basuras médicas.
5. Ajustes para el análisis del resultado
Fije la línea de fondo en una región antes de la amplificación exponencial donde están relativamente estables las señales fluorescentes de todas las muestras (ningunas fluctuaciones significativas en todas las muestras); fije el punto inicial (número de ciclo) lejos de las fluctuaciones de la señal en comenzar
fase de colección de la fluorescencia; fije la punto final (número de ciclo) 1~3 ciclos antes del Ct de la primera muestra para incorporar la amplificación exponencial. se recomiendan 4~15 ciclos.
Fije la derecha del umbral sobre el punto más alto de la curva negativa de la amplificación del control (curva irregular del ruido).
6. Criterios del control de calidad
Antes de evaluar los resultados del espécimen, el control positivo y el control negativo se deben interpretar usando la tabla de la interpretación abajo, y el control positivo y la curva negativa del control se deben realizar correctamente, si no el resultado de la muestra es inválido.
Canales
Controles |
Valor del umbral del ciclo (Ct) |
| FAM |
VIC |
| Control positivo |
Ct > 40 o UNDET |
Ct > 40 o UNDET |
| Control negativo |
≤ 35 del Ct |
≤ 35 del Ct |
7. Interpretación de los resultados de la prueba
Los canales para el virus de Monkeypox, resultado de FAM de la detección se deben interpretar como abajo.
a) positivo: S-se forma el ≤ 38 del Ct y la curva de la amplificación.
b) sospechó: 38 < Ct=""> 40 o ≤ nulo 35 del Ct y del Ct en el canal de VIC para la segunda prueba.
c) negativa: Ct > 40 o ≤ nulo 35 del Ct y del Ct en el canal de VIC.
d) contra-prueba: Ct > 40 o Ct nulo y Ct > 35 en el canal de VIC.
