T4 ligasa del ADN, LC
No/Especificación: E1014-E/1000 Weiss U
Concentración: 1 U/μL de Weiss
Descripción del producto
La DNA ligasa T4 cataliza la formación de enlaces fosfodiéster entre los terminales 5'-fosfato y 3'-hidroxilo yuxtapuestos en ADN o ARN de doble cadena.Esta enzima es capaz de reparar los cortes de una sola hebra en el ADN de doble hebra, ARN, o híbridos ADN/ARN, y puede unir fragmentos de ADN con extremos pegajosos o contundentes, pero es inactivo en ácidos nucleicos de cadena única.
La ligasa de ADN T4 requiere ATP como cofactor.
Condición de almacenamiento y vida útil
Conservar a -20°C. El producto tiene una validez de 2 años.
Fuente
Cepa recombinante de E. coli que contiene el gen 30 clonado a partir de bacteriófagos T4.
Definición de la unidad
A 37°C, 1 unidad de enzima de Weiss cataliza la conversión de 1 nmol de [32PPi] en un estado de adsorción de carbón activado en 20 minutos.
La actividad enzimática se determina en la siguiente mezcla: 66 mM de Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM de MgCl2, 0,066 mM de ATP, 10 mM de DTT, 3,3 μM de [32P]ortofosfato (PPi).
Una unidad de Weiss es equivalente a aproximadamente 200 unidades de ligadura de extremo cohesivo (CEU), que es equivalente al número de fragmentos de ADN digeridos HindIII que pueden ligarse en 30 minutos a 16 °C.λ fragmentos de ADN.
Aplicación
- Fragmentos de ADN generados por enzimas de restricción de clonación
- Productos de PCR clonados
- Ligadura de oligonucleótidos de doble cadena o adaptadores al ADN
- Mutagénesis dirigida al sitio
- Polimorfismo amplificado de la longitud del fragmento (AFLP)
- Detección de ARN mediado por ligasa
- Reparación de nick en ADN de doble cadena, ARN o híbridos de ADN/ARN
- Autocirculación del ADN lineal
