[Nombre de producto] equipo de la detección del ácido nucléico del virus COVID-2019 (dual-RTPCR) [artículo NO] A001
[Tipos de producto] 50 pruebas/equipo
[Uso previsto]
Este equipo se utiliza para la detección del ácido nucléico del coronavirus nuevo (2019-ncov) en toda clase de muestras de las vías respiratorias, tales como esponja faríngea, esputo, líquido de lavado alveolar, etc. Los resultados se pueden utilizar para la diagnosis auxiliar de pacientes con la infección nueva del coronavirus o sospechar de la infección nueva del coronavirus, proveyendo de la base de diagnóstico molecular para los pacientes la infección.
[Principio de la prueba]
El sistema dos de cartillas de la polimerización en cadena y las puntas de prueba fueron diseñados basaron en la secuencia conservadora del gen del capítulo de la codificación de la lectura Open (ORF1ab) y del gen de la proteína de la base (gen de N) del coronavirus nuevo (2019-nCoV), y el equipo de la detección alcanzó simultáneamente la detección de las blancos ya mencionadas con alta especificidad. Con la reacción de la polimerización en cadena yendo, la señal de la fluorescencia generada por la punta de prueba se podía detectar por el detector automático de la polimerización en cadena de la fluorescencia y la supervisión en tiempo real observada de RT-PCR. [Composición]
| Componente |
50 pruebas/equipo |
Componentes principales |
|
2 × RT-PCR
solución de la reacción
|
tubo 625 μL×1
|
Tris, KCl, MgCl2,
dNTP, etc.
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| 2019-ncov |
tubo 310 μL×1 |
Cartilla, punta de prueba |
| punta de prueba de la cartilla |
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| Líquido de aislamiento |
500 tubos μL×2 |
Aceite mineral |
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Mezcla de la enzima
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tubo 65 μL×1
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Transcriptase reverso,
Inhibidor de la ARNasa, Taq
enzima, etc
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| Control negativo |
200 μL×1tube |
Agua tratada DEPC |
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Control positivo
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tubo 200 μL×1
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El contener de los plásmidos
fragmentos del gen de la blanco
|
Nota: El control de calidad positivo y el control de calidad negativo serán fijados para que cada prueba supervise el ambiente del cuerpo y de la operación de prueba; los productos negativos y positivos del control de calidad se han embalado en el kitand se pueden utilizar directamente sin la extracción.
[Condiciones de almacenamiento y fecha de vencimiento]
1. Mantenga lejos de luz y de at-20±5℃.Transport sellado en el ℃ 2~8 o el tipo ambientes del hielo seco por 7 días a lo más. Tiene una vida útil de 6 meses.
2. Avoid repitió ciclos hielo-deshielo. Cinco ciclos hielo-deshielo no afectarán a los resultados de la detección.
[Instrumentos aplicables]
Puede ser adaptada al instrumento cuantitativo fluorescente en tiempo real de la polimerización en cadena con FAM y a los canales del maleficio (VIC/Joe) de diversos fabricantes.
[Requisito de la muestra]
1. Tipo aplicable de la muestra: líquido de lavado alveolar, esponja de la garganta, esputo.
2. Colección de la muestra: recoja las muestras en envases estéril con un volumen de muestra de ningún menos que 1ml.
- Muestree el almacenamiento y el transporte: las muestras que se probarán se pueden colocar en el ℃ 2 ~ el ℃ 8 por 72 horas, y el almacenamiento de larga duración será puesto en el ≤ - ℃ 20 para evitar la congelación repetida y el deshielo. Los especímenes fueron transportados en las botellas que se encrespaban selladas con hielo o en las cajas de la espuma selladas con hielo.
[Pasos]
1. proceso de la muestra (instalación de tratamiento de la muestra)
Tipo del espécimen: espécimen superior de las vías respiratorias (URT): incluyendo la esponja faríngea, la esponja nasal, el extracto del nasopharynx y la aclaración faríngea.
2 S-A001A1
Baje el espécimen de las vías respiratorias (LRT): incluyendo el extracto de las vías respiratorias, líquido del broncholavage, espécimen de la biopsia del tejido pulmonar.
Los métodos de proceso de la muestra se muestran en la tabla siguiente:
|
Muestra
tipo
|
Muestra que maneja método |
| tejido |
Tome las muestras de tejido apropiadas, la mezcla con salino normal o PBS en
la proporción de 1:5, muele el homogenado, centrifugado 12000g por 5 minutos, y toma a 300 el μ l sobrenadante para la extracción de la muestra.
|
| esponja |
Añada una cantidad apropiada de salino normal o de PBS en la esponja para asegurar
que el jefe del cepillo de la esponja puede ser sumergido en la solución y después vibrar violentamente por 2 minutos. Tome a 300 el μ l solución para la extracción de la muestra.
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| esputo |
Tome a 200 el μ l muestra, añada 200 el μ l agente de licuefacción del esputo, sacudida y
mézclese bien, tome un baño caliente en el ℃ 37 por 10 minutos, y después tome a 300 el μ L para la extracción.
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| humor |
Tome a 300 el μ l muestras del fluído corporal directamente para la extracción. |
2. extracción del ARN viral
El uno mismo preparó el reactivo de la extracción, o según las instrucciones del equipo viral de la extracción del ácido nucléico del ARN (método de la centrifugación) de la biotecnología Co. de Guangzhou DEAOU, Ltd
3. preparación el reactivo (sitio de la preparación el reactivo)
3.1. Saque los componentes en la caja de embalaje y póngalos en la temperatura ambiente. Después de que la temperatura se equilibre a la temperatura ambiente, mezcle los uniformemente y el centrifugado ellos para su uso posterior.
3.2. Prepare la solución de la reacción según el número requerido de tubos de la reacción. Fije el número requerido de tubos de la reacción como n (n = número de muestras + 1 control positivo del tubo + 1 control negativo del tubo). El método de la preparación es como sigue:
| Componente |
Dosificación por persona |
Dosificación de N |
|
almacenador intermediario 2×Reaction
|
μL 12,5
|
ΜL de 12.5× N
|
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Mezcla de la enzima
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μL 1,3
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ΜL de 1.3× N
|
Después de mezclar el sistema de reacción preparado, cada tubo de la reacción consigue a 20 el μ L solución de la reacción y 20 el μ l líquido de cierre se añade a cada tubo. Transferencia al área de proceso de la muestra.
4. adición de la muestra (instalación de tratamiento de la muestra)
Tome 5μL de las muestras arriba procesadas, del control positivo y del control negativo respectivamente y añádalos en el tubo correspondiente de la reacción de la polimerización en cadena 0.2ml, cierre el tubo y transfiéralos al área de la detección.
Nota: en curso de muestra que añade, es necesario evitar usar la pipeta para soplar en varias ocasiones, para no causar un gran número de burbujas que afecten a los resultados experimentales. Además, es necesario centrifugar por poco tiempo antes de usar la máquina para la amplificación, para quitar las burbujas tanto cuanto sea posible. amplificación 5.PCR (sitio de la amplificación de la polimerización en cadena)
5,1 ajuste del instrumento (tome el instrumento ABI7500 como un ejemplo)
Ponga el tubo de la reacción de la polimerización en cadena en el instrumento de la polimerización en cadena, y fije las muestras negativas, positivas y desconocidas según la secuencia correspondiente de muestras. Puesto que este equipo necesita la detección doble, contiene dos puntas de prueba con diversas etiquetas fluorescentes. FAM y los canales de Vic se deben seleccionar simultáneamente para divulgar a grupos fluorescentes.
5.2. Procedimiento de la amplificación
| Tiempo |
Temperatura |
Instrucciones |
| 10min |
50℃ |
Transcripción reversa |
| 1 minuto |
95℃ |
Pre degeneración |
| 15s |
95℃ |
|
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La colección de la señal de la fluorescencia se fija en el ℃ 60, y el sistema de reacción se fija en 25 el μ L.
[Estándar del control de calidad]
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Determinación de
resultados de la prueba
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FAM |
HEX/VIC |
Interpretación de los resultados de la prueba |
| Control positivo |
Ct
number≤35
|
Ct
number≤35
|
Cuando se cumplen los dos requisitos
en el mismo experimento, indica
que el experimento es eficaz, si no él se considera inválido.
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| Control negativo |
Ningunos Ct |
| FAM |
HEX/VIC |
Determinación de los resultados de la prueba |
|
Ct
number≤40
|
Positivo |
|
40<Ct number<45
|
Reextraiga y repita la prueba, si el valor del Ct todavía estaba en la gama, y es positivo. |
|
Número del CT < 45="" in="" any="" channel="">
canal.
|
Si los resultados de diversas muestras de la misma persona siguen siendo lo mismo que antes, o ambos
se detectan los canales, él se juzgan para ser positivos.
|
| Ningunos Ct |
Negativo |
6. análisis del resultado
La línea de fondo se fija con 3-10 o 6-15 ciclos de señales de la fluorescencia. El principio del ajuste del umbral es que la línea del umbral apenas excede el punto más alto de la curva negativa de la amplificación del control, y puede también ser ajustada según la condición de ruido.
Juicio del resultado
| FAM |
HEX/VIC |
Determinación de los resultados de la prueba |
|
Ct
number≤40
|
Positivo |
|
40<Ct number<45
|
Reextraiga y repita la prueba, si el valor del Ct todavía estaba en la gama, y es positivo. |
|
Número del CT < 45="" in="" any="" channel="">
canal.
|
Si los resultados de diversas muestras de la misma persona siguen siendo lo mismo que antes, o ambos
se detectan los canales, él se juzgan para ser positivos.
|
| Ningunos Ct |
Negativo |
[índice del funcionamiento de producto]
1. Especificidad
La punta de prueba de la cartilla usada en este equipo se diseña según la secuencia conservada de coronavirus nuevo (2019-ncov), que tiene una alta tarifa de la detección para el fragmento del gen de la blanco. Este equipo no tiene ninguna reacción cruzada con las muestras del coronavirus (NL63, HKU1, 229 e229e OC43, SARS SARS), gripe un virus,
virus de la hepatitis b, virus sincitial respiratorio, adenovirus, virus de gripe, bacilo de la Klebsiella de la pulmonía, estreptococo pneumoniae, Hemophilus influenzae, Pseudomonas aeruginosa, legionella eosinófilo del pulmón, bacili de la tos ferina, micoplasma del estafilococo áureo y de la pulmonía y chlamydia de la pulmonía. El índice de la coincidencia de materiales de referencia positivos y negativos en empresas de la prueba el is100%.
2. precisión
El coeficiente de variación (el CV%) del valor del CT en los resultados de la prueba es el inferior o igual 5%.
3. Límite de detección mínimo
El límite de detección mínimo de este equipo es 1000 copias/ml.
4. Gama linear
2×10 ~2×10 copies/mL
[Notas]
1. Este producto se utiliza solamente para la diagnosis externa.
2. La detección de ácido nucléico viral depende del proceso correcto de la muestra, del transporte, de la preparación, de la colección irrazonable de la muestra del etc., procesando, transporte y la concentración baja de la muestra puede llevar a los resultados del falso negativo.
3. La prueba de la polimerización en cadena o la prueba relacionada será actuada por la persona calificada o familiar.
4. La sustancia negativa y positiva del control será fijada para cada prueba.
5. Actúe por favor el experimento estrictamente en diversas áreas. Los artículos en cada área están para el propósito especial. No cruce los utilizan para evitar la contaminación. Limpie el banco de trabajo inmediatamente después del experimento.
6. Todas las muestras de la prueba serán miradas como sustancias infecciosas. Durante el experimento, los guantes disponibles del clothesand del trabajo serán llevados y los guantes serán substituidos con frecuencia para evitar la contaminación cruzada entre las muestras. La operación y la eliminación de residuos de la muestra cumplirán los requisitos de leyes relevantes y de regulaciones: Las “pautas generales para la seguridad biológica de laboratorios microbiológicos y biomédicos “y de “regulaciones sobre la gestión de desechos clínica” publicaron por el Ministerio de Sanidad.
7. el hipoclorito del 10% o el alcohol del 75%, la lámpara ultravioleta o el ozono serán utilizados para desinfectar instrumento la plataforma de la operación, la pipeta, la centrifugadora, de la amplificación de la polimerización en cadena y otros equipos.
8. Las basuras (tales como cabezas del arma) que se ha expuesto a las muestras estándar y a los materiales de referencia en la prueba, los tubos centrifugados y las muestras se han amplificado que serán desechadas inofensivo antes de ser desechado.
9. El reactivo será derretido y mezclado completamente en la temperatura ambiente.
10. La mezcla de reacción de la polimerización en cadena se debe guardar lejos de luz.
11. Intente evitar burbujas en el tubo de la reacción.
12. No mezcle los reactivo de diversos lotes. Utilice por favor el equipo dentro del período de la validez.
】 Amonestador del 【
1. Debe guardar lejos de luz y almacenar el ℃ at-20±5. Transporte en el ℃ 2~8 o en el tipo ambientes del hielo seco por 7 días a lo más. Tiene una vida útil de 6 meses.
2. Avoid repitió ciclos hielo-deshielo. Cinco ciclos hielo-deshielo no afectarán a los resultados de la detección.
