Equipo ácido nucléico de la detección de la polimerización en cadena del equipo del vibrio parahemolítico
(Método Polimerización en cadena-fluorescente de la punta de prueba)
Uso previsto:
Este equipo es conveniente para la detección específica de vibrio parahemolítico patógeno (Vpa) en cebo, muestras de agua, almácigos del camarón, tejidos del camarón y productos procesados.
Principio:
Este equipo utiliza un fragmento específico del vibrio parahemolítico (Vpa) para diseñar una punta de prueba de la punta de prueba de la cartilla, que puede atar específicamente a una SECCIÓN de la plantilla de la DNA en el medio de la región de la amplificación de la cartilla. Durante el proceso de la extensión de la polimerización en cadena, la actividad del exonuclide de la enzima de Taq corta el 5" - terminal fluoróforo de la punta de prueba y lo hace libre en el sistema de reacción. Así, el 3" - separaron al grupo apagado extremo, y la fluorescencia fue emitida, que fue detectada por el instrumento de la polimerización en cadena de la fluorescencia para alcanzar la detección de ácido nucléico del vibrio parahemolítico (Vpa) en el sistema de reacción totalmente cerrado.
Componentes principales:
| Componente |
Especificación |
| Líquido de la reacción de la polimerización en cadena |
24 tubos |
| Control positivo |
1 tubo |
| Control negativo |
1 tubo |
Nota: los componentes en diversos lotes de equipos no deben ser permutables.
Requisitos de la muestra:
1. Tipo de la muestra
Almácigo del camarón, tejido del camarón, cuerpo del agua, cebo, productos procesados, etc
2. Muestree la colección y el transporte
Muestree la colección y el transporte será realizado de acuerdo con NY/T 541. Las muestras serán transportadas al laboratorio cuanto antes bajo condiciones refrigeradas para evitar hielo-deshielo repetida.
3. Preservación de la muestra
Puede ser almacenado por 24 horas en 2℃~8℃, y puede ser almacenado durante mucho tiempo en -20℃.
Usando Micgene 242/244/244IVD y ABI QuantStudio 5:
los procedimientos se fijan como abajo:
| Pasos |
Número de ciclo
|
Temperatura |
Tiempo |
| 1 |
1 |
95℃ |
3min |
| 2 |
45 |
95℃ |
10s |
| 60℃ |
30sCollect el fluorescente
|
FAM fue seleccionado para el canal de la detección.
Los resultados de la interpretación
| Resultados |
Valor del Ct |
| Positivo |
Ct≤40 |
| Negativa |
Ningún valor o Ct value≥45 del Ct |
| Área de gris |
40<Ct<45>
|
Nota: El resultado se juzga para ser el área gris, que necesita ser vuelta a inspeccionar. Si vuelva a inspeccionar el resultado es valor del Ct < 45="" is="" considered="" as="" positive="">
Análisis del resultado:
Análisis automático usando la instrumentación
Control de calidad:
Control negativo: Ninguna curva obvia de la amplificación del canal de la detección de FAM;
Control positivo: El canal de FAM mostró la curva obvia de la amplificación, valor ≤30 del Ct;
Las condiciones antedichas se cumplen simultáneamente en el mismo experimento; de otra manera, el experimento es inválido y se requiere el reexaminar.
